クロマチン構造変化を介した転写調節機構の解明

阐明染色质结构变化介导的转录调控机制

• 批准号: 09277222
• 负责人: 太田 力
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09277222/
• 关键词: クロマチン; SWIタンパク; 転写

ヒトSWI蛋白質の1つのサブユニット(SWI2)のカルボキシル末端の約30kdの蛋白質断片を大腸菌を用いて大量発生させ、精製した。10mgの蛋白質断片を用いて抗体を作成した。western法を用い、HeLa細胞抽出液をアッセイしたところ200kdのバンドが検出された。これはSWI2全長の大きさと一致した。そこで、western法をアッセイ系に用いてHeLa細胞抽出液からスモ-ルスケールでヒトSWI蛋白質の精製を行った。その結果、ヒトSWI蛋白質は12種類以上のサブユニットから成る蛋白質複合体であることが分かった。ゲル濾過による解析からこのヒトSWI蛋白質複合体は分子量2000kdの巨大複合体であることも分かった。次に、ヒトSWI蛋白質複合体の酵素活性を調べてみた。in vitroクロマチンDNA再構成系を用いて、精製したヒトSWI蛋白質複合体がクロマチン構造がもたらす転写抑制効果を解除する機能を持つことが分かった。この結果は、in vivoを反映する結果であり、世界ではじめて検出されたものと思われる。しかし、精製したヒトSWI蛋白質の量が少ないため詳しい解析が進んでいない。現在、HeLa細胞及び牛肝臓の核抽出液を用いてヒトSWI蛋白質を大量に精製する計画を進めている。また、ヒトSWI蛋白質複合体のクロマチン構造がもたらす転写抑制効果を解除する機能にはコファクターが必要であることが分かった。そこで、このコファクターの精製を行いcDNAをクローニングし、SWI蛋白質の転写活性化の機構を解明することを計画している。

SWI protein fragment of about 30kd at the end of SWI protein 1 was produced and purified in large quantities by E. coli. 10mg of protein was produced with antibody. Western method, HeLa cell extract, 200kd The SWI2 is the same size. The western method was used to purify SWI protein from HeLa cell extract. As a result, SWI protein is more than 12 kinds of protein complex. SWI protein complex with molecular weight of 2000kd The enzyme activity of SWI protein complex is regulated by enzyme. In vitro DNA reconstruction system uses, refines, and removes SWI protein complexes. The result is in vivo. The result is in vivo. The world is in vivo. The amount of SWI protein is very small, and the analysis is very detailed. At present, HeLa cells and bovine liver extracts are used to purify SWI protein in large quantities. The structure of SWI protein complex is necessary to remove the inhibition effect. The purification of SWI protein and the mechanism of SWI protein activation are discussed in detail.

项目成果

Wakasugi,T.: "Complete nucleotide sequence of the chloroplast genome from the green alga Chlorella vulgaries;The existence of genes possibly involved in chloroplast division" Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 94. 5967-5972 (1997)

Wakasugi,T.：“绿藻普通小球藻叶绿体基因组的完整核苷酸序列；可能参与叶绿体分裂的基因的存在”Proc.Natl.Acad.Sci.USA。

Hisatake,K.: "Evolutionary Conservation of Human TAF31 and TAF80 and Interactions of TAF80 with Other TAFs and with General Transcription Factors." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 92. 8195-8199 (1995)

Hisatake,K.：“人类 TAF31 和 TAF80 的进化保守性以及 TAF80 与其他 TAF 和一般转录因子的相互作用。”