組換え蛋白質複合体の精製と機能解析

重组蛋白复合物的纯化和功能分析

基本信息

批准号：
10780428
负责人：
太田力
金额：
$ 1.47万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

1. 研究の目的:真核生物の遺伝的組換えは、減数分裂期組換え、DNA傷害の修復、DNA複製時エラーの除去、遺伝子発現制御など多方面で機能して、生物の多様性と子孫の安定な保持において重要な役割を担っている。特に、組換えは減数分裂期で高頻度で起こり、出芽酵母では、これまで数十個の遺伝子が同定され、3つのグループに分けられている。即ち、組換えを制御するグループ(I)、組換えの開始である二本鎖DNA切断の導入に関与するもの(II)、相同DNAの検索、対合と交叉に働くもの(III)である。これら3つのグループの遺伝子産物は蛋白質複合体を形成することがTwo-Hybrid法、共同的免疫沈降法及び遺伝的解析から示唆されている。本研究では組換えを行う蛋白質複合体を分離、精製し、その活性解析を目的とした。2. 研究成果:酵母の遺伝学的研究から相同組換えの最初の反応である二本鎖DNAの切断に関与すると考えられているMRE11遺伝子のアミノ末端にGST-tagを付けたものを大腸菌で発現させGSTに対するカラム、Niカラム、dsDNAカラム、MonoSカラムを用いてMRE11蛋白質を精製することに成功した。このMRE11蛋白質は一本鎖DNAおよび二本鎖DNAの切断活性を持つことが分かった。また、酵母から精製したMRE11蛋白質の活性を調べた結果、大腸菌を用いた組換え体MRE11蛋白質と同様の活性が検出された。

1。研究的目的：真核生物的遗传重组在许多领域的作用，包括减数分裂重组，修复DNA损伤，去除DNA复制期间的误差和基因表达控制，在生物学多样性和稳定的后代保留中起重要作用。特别是，重组经常在减数分裂阶段发生，在萌芽的酵母中，已经鉴定出数十个基因并分为三组。也就是说，有些组控制重组（i），参与引入双链DNA断裂的人（II），以及那些从事寻找同源DNA，配对和越过（III）的工作组。两种杂交方法，协作免疫沉淀方法和遗传分析表明，这三组基因产物形成蛋白质复合物。这项研究旨在分离和纯化重组蛋白复合物并分析其活性。 2。研究结果：根据酵母遗传研究，GST-TAG在大肠杆菌中表达，GST-TAG附在MRE11基因的氨基末端，据认为这参与了双链DNA的同源重组，在Yeast中的同源重组的第一个反应，在酵母中，使用MRE11蛋白和MRE11蛋白进行了使用G.Sts，ni columss，ni columns and ni columns and Monnina d. dsdna d. ddna d. ddna colders and Monnina colders。发现该MRE11蛋白具有单链DNA和双链DNA的裂解活性。此外，研究了从酵母中纯化的MRE11蛋白的活性，并检测到与使用大肠杆菌的重组MRE11蛋白相似的活性。