組換え蛋白質複合体の精製と機能解析

重组蛋白复合物的纯化和功能分析

基本信息

  • 批准号:
    10780428
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.47万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
  • 财政年份:
    1998
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1998 至 1999
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

1. 研究の目的:真核生物の遺伝的組換えは、減数分裂期組換え、DNA傷害の修復、DNA複製時エラーの除去、遺伝子発現制御など多方面で機能して、生物の多様性と子孫の安定な保持において重要な役割を担っている。特に、組換えは減数分裂期で高頻度で起こり、出芽酵母では、これまで数十個の遺伝子が同定され、3つのグループに分けられている。即ち、組換えを制御するグループ(I)、組換えの開始である二本鎖DNA切断の導入に関与するもの(II)、相同DNAの検索、対合と交叉に働くもの(III)である。これら3つのグループの遺伝子産物は蛋白質複合体を形成することがTwo-Hybrid法、共同的免疫沈降法及び遺伝的解析から示唆されている。本研究では組換えを行う蛋白質複合体を分離、精製し、その活性解析を目的とした。2. 研究成果:酵母の遺伝学的研究から相同組換えの最初の反応である二本鎖DNAの切断に関与すると考えられているMRE11遺伝子のアミノ末端にGST-tagを付けたものを大腸菌で発現させGSTに対するカラム、Niカラム、dsDNAカラム、MonoSカラムを用いてMRE11蛋白質を精製することに成功した。このMRE11蛋白質は一本鎖DNAおよび二本鎖DNAの切断活性を持つことが分かった。また、酵母から精製したMRE11蛋白質の活性を調べた結果、大腸菌を用いた組換え体MRE11蛋白質と同様の活性が検出された。
1. の study aim: eukaryotes の but 伝 group in え は, meiosis in え, DNA damage の repair, DNA replication エ ラ ー の removed, but 伝 発 now suppression な ど various で function し て, biological の others more sons と の settle な keep に お い て cut を bear important な service っ て い る. に, set in え は meiosis で high frequency で up こ り, budding yeast で は, こ れ ま で dozens の heritage 伝 son が with fixed さ れ, 3 つ の グ ル ー プ に points け ら れ て い る. Namely ち, group in え を suppression す る グ ル ー プ (I), group in え の began で あ る 2 lock cut DNA の import に masato and す る も の (II), the same DNA の 検 suo, polices と cross に 働 く も の (III) で あ る. こ れ ら 3 つ の グ ル ー プ の heritage 伝 zi chan formation は protein complex を す る こ と が Two - a Hybrid method, common immune sink method and び survived 伝 parsing か ら in stopping さ れ て い る. In this study, で で group exchange えを is used for the を separation and refinement of う protein complexes, as well as <s:1> and そ activity analysis を. The aim is と and た た た. 2. Results: yeast の heritage 伝 learning research か ら in same group え の initially の anti 応 で あ る 2 lock の cut DNA に masato and す る と exam え ら れ て い る MRE11 heritage 伝 son の ア ミ ノ に GST - at the end tag を pay け た も の を coliform で 発 now さ せ GST に す seaborne る カ ラ ム, Ni カ ラ ム, dsDNA カ ラ ム, MonoS Youdaoplaceholder0 with てMRE11 protein を refining する た とに とに successful た た. The <s:1> MRE11 protein および one lock of DNAおよび two lock of DNA <s:1> severing activity を holds を <s:1> とが とが and った った respectively. ま た, yeast か ら refined し た MRE11 protein の activity を adjustment べ た results, coliform を い た MRE11 protein group in え body と with others の active が 検 out さ れ た.

项目成果

期刊论文数量(10)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Kobayashi,M: "DNA supercoiling factor localyzes to puffs on polytene vhromosomes in Drosophila" Mol.Cell.Biol. 18. 6737-6744 (1998)
Kobayashi,M:“DNA 超螺旋因子定位于果蝇多线染色体上的泡”Mol.Cell.Biol。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Lin,Y: "The HBV X protein is a cofactor of activated transcription that modulates the transcription machinery and disal binding activators" J.Biol.Chem. 273. 27097-27103 (1998)
Lin,Y:“HBV X 蛋白是激活转录的辅助因子,可调节转录机制和 disal 结合激活剂”J.Biol.Chem。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Okamoto,T: "Analysis of the role of TFIIE in trnascriptional regulation through structure-function studies of TFIIEb" J.Biol.Chem. 273. 19866-19876 (1998)
Okamoto,T:“通过 TFIIEb 的结构功能研究分析 TFIIE 在转录调控中的作用”J.Biol.Chem。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Usui,T: "Complex formation and functional versaltility of Mre11 of budding yeast in recombination" Cell. 95. 705-716 (1998)
Usui,T:“重组中芽殖酵母 Mre11 的复杂形成和功能多样性”细胞。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Shinohara,A: "Yeast Rad52-dependent homologous recombination involved an interaction with a single-stranded DNA binding protein,RPA" Genes to Cells. 3. 145-156 (1998)
Shinohara,A:“酵母 Rad52 依赖性同源重组涉及与单链 DNA 结合蛋白 RPA 的相互作用”基因与细胞。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
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  • 通讯作者:
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  • 通讯作者:
    緒方一博

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