クロマチン構造を介した転写調節機構の解明

阐明染色质结构介导的转录调控机制

• 批准号: 10173226
• 负责人: 太田 力
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10173226/
• 关键词: クロマチン構造; 転写; SWI蛋白質複合体; 核マトリックス

1. 研究目的:真核生物のゲノムDNAは生体内では、ヒストンと結合しクロマチン構造をとっている。従って、多くの生体反応は以下の2つのステップを経て行われると思われる。(1)まず、高度に折り畳まれたクロマチンが開く。(2)次に、生体反応開始蛋白か開いたクロマチンDNAを認識し、作動する。従来の生体反応の研究は(2)のステップに関するものがほとんどで、このステップについては膨大なデータが蓄積しつつある。一方、(1)のステップに関する研究はDNAase超感受性領域の検索といった研究しかなされておらず、(2)のステップの研究に比べて非常に遅れている。真核生物の生体反応調節機構を解明する上で(1)の研究は(2)の研究同様に非常に重要と思われる。近年、酵母を用いた遺伝学的解析から上記2つの転写反応ステップに関与するSWI遺伝子が同定された。そこで、本研究はクロマチン構造を介した転写制御機構を生化学の手法を用いて解明することを目的とした。2. 研究成果:ヒトSWI蛋白質の1つのサブユニット(SWI2)の抗体を作成し、western法をアッセイ系に用いてHeLa細胞からスモールスケールでヒトSWI蛋白質の精製を行い、約80%精製のヒトSWI蛋白質複合体画分を得た。In vitroクロマチンDNA再構成系を用いて、精製したヒトSWI蛋白質複合体がクロマチン構造がもたらす転写抑制効果を解除する機能を持つことが明らかになった。また、ヒトSWI蛋白質複合体のクロマチン構造がもたらす転写抑制効果を解除する機能にはコファクターが必要であることも明らかになった。更に、ヒトSWI蛋白質複合体は核マトリックスと結合することも明らかになった。

1. Objective: To study the structure of eukaryotic DNA in vivo. In addition, many biological reactions occur in the following two ways: (1)まず、高度に折り畳まれたクロマチンが开く。(2)The next step is to recognize and act on the DNA of the organism's anti-tumor initiation protein. In recent years, the study of biological reaction has been carried out in two ways: (1) the relationship between the growth and accumulation of biological reaction, and (2) the relationship between biological reaction and accumulation of biological reaction. One is that (1) the study of the topic is related to the study of DNAase supersensitivity domain, and (2) the study of the topic is related to the study of DNA supersensitivity domain. The understanding of the regulatory mechanism of eukaryotic organisms is very important for (1) research and (2) research. In recent years, the use of yeast in the analysis of genetics, from the above note 2 to write anti-virus related to SWI gene has been determined. This study is aimed at understanding the mechanism of biological control. 2. Research results: Preparation of antibodies against SWI protein 1 and SWI2, Western method, purification of SWI protein using HeLa cells, and purification of SWI protein complex by about 80% purification. In vitro DNA reconstruction system uses, refines, and removes SWI protein complexes. The structure of SWI protein complex is necessary to remove the inhibition effect. The SWI protein complex is a complex that binds to the nucleus.

项目成果

Kobayashi,M: "DNA supercoiling factor localyzes to puffs on polytene vhromosomes in Drosophila" Mol.Cell.Biol. 18. 6737-6744 (1998)

Kobayashi,M：“DNA 超螺旋因子定位于果蝇多线染色体上的泡”Mol.Cell.Biol。

Lin,Y: "The HBV X protein is a cofactor of activated transcription that modulates the transcription machinery and disal binding activators" J.Biol.Chem. 273. 27097-27103 (1998)

Lin,Y：“HBV X 蛋白是激活转录的辅助因子，可调节转录机制和 disal 结合激活剂”J.Biol.Chem。

Okamoto,T: "Analysis of the role of TFIIE in transcriptional regulation through structure-function studies of TFIIEb" J.Biol.Chem. 273. 19866-19876 (1998)

Okamoto,T：“通过 TFIIEb 的结构功能研究分析 TFIIE 在转录调控中的作用”J.Biol.Chem。

Usui,T: "Complex formation and functional versaltility of Mre11 of budding yeast in recombination" Cell. 95. 705-716 (1998)

Usui,T：“重组中芽殖酵母 Mre11 的复杂形成和功能多样性”细胞。

Shinohara,A: "Yeast Rad52-dependent homologous recombination involved an interaction with a single-stranded DNA binding protein,RPA" Genes to Cells. 3. 145-156 (1998)

Shinohara,A：“酵母 Rad52 依赖性同源重组涉及与单链 DNA 结合蛋白 RPA 的相互作用”基因与细胞。