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クロマチン構造を介した組換え反応の機能解析

染色质结构介导的重组反应的功能分析

基本信息

批准号：
09263219
负责人：
太田力
金额：
$ 1.28万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09263219/
关键词：
クロマチン Mre11タンパク組換え

项目摘要

酵母の遺伝学的研究から相同組換えの最初の反応である二本鎖DNAの切断に関与すると考えられているMRE11遺伝子のアミノ末端にflag-tag(Asp-Tyr-Lye-Asp-Asp-Asp-Asp-Lyeの8個のアミノ酸)を付けたものを酵母で発現させflag-tagに対する抗体カラムを用いてMRE11蛋白質複合体を精製することに成功した。精製したMRE11蛋白質画分にはRAD50蛋白質も含まれていた。これはMRE11蛋白質とRAD50蛋白質が酵母の細胞内で蛋白質複合体を形成することを示唆したものである。このMRE11蛋白質複合体は一本鎖DNAおよび二本鎖DNAの切断活性を持つことが分かった。次に、MRE11蛋白質を大腸菌を用いて大量発現させNiアガロース、GSTセファロース、dsDNAセルロース、MonoS(FPLC)を用いて精製した。120kdの単一の蛋白質を得ることができた。MRE11蛋白質の抗体をもちいたwestern法でMonos画分をアッセイしたところ120kdのバンドが検出された。従って、この120kdの蛋白質はMRE11蛋白質であると思われる。精製したMRE11蛋白質は一本鎖DNA切断活性を持つことが分かった。平成10年度はこのMRE11蛋白質複合体の大量精製を行い、含まれる蛋白質の同定と生化学的解析を行うつもりである。精製したに組換えに関与する蛋白質複合体のなかには、今まで知られていない蛋白質の存在が予想される。そこで未知の蛋白質の機能を調べるためにその遺伝子のクローニングを行う。次に、得られたcDNAあるいはgenomicDNAを用いてその遺伝子の変異株を酵母で作成しin vivoでの機能を調べることを計画している。

The study of Saccharomyces cerevisiae was carried out in the same way. In the first place, the DNA gene was cut off from ordinary universities and tested. The terminal flag-tag (Asp-Tyr-Lye-Asp-Asp-Asp-Asp-Lye 8 tryptic acid) in the terminal of the flag-tag gene was detected by the yeast yeast strain. The recombinant MRE11 protein was used to detect the antibody. Good health, good health and success. Seminal MRE11 protein is divided into RAD50 protein, RAD50 protein and so on. MRE11 protein, RAD50 protein, yeast protein, intracellular protein, protein, complex, protein, protein and protein. The cut-off activity of MRE11 protein in one book, DNA protein, DNA in an ordinary university, keeps the cut-off activity in different parts. Secondary and MRE11 proteins were used to detect large amounts of Ni, GST, dsDNA, and MonoS (FPLC) proteins. 120kd, one protein, one protein. MRE11 protein, antibody, antibody, western, Monos, 120kd protein, antibody, antibody, 120kd protein, MRE11 protein, protein. Seminal MRE11 protein, a book on DNA cleavage activity, maintained the activity of DNA cleavage. In the year of Pingcheng, there are a large number of MRE11 protein complexes, including a large number of proteins, biochemical analysis, biochemical analysis and biochemical analysis. The combination of protein and protein is very important. Today, we know that there is an ideal protein. If you don't know the protein, the machine will be able to make sure that you don't know how to do it. For the second time, the cDNA machine was used to make the in vivo machine by using the yeast strain of the mother cell to make the in vivo machine.