肝炎デルタウィルスRNA型リボザイムの構造と作用機構

丁型肝炎病毒RNA型核酶的结构和作用机制

• 批准号: 09278210
• 负责人: 上杉 晴一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Yokohama National University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09278210/
• 关键词: リボザイム; 肝炎デルタウィルス; RNA; 分子生物学; 金属酵素; 構造; NMR; CD

本研究の目的は、肝炎デルタウィルス(HDV)RNAのリボザイム活性(RNA鎖切断)に着目し、その溶液中の構造および触媒作用に必要な金属イオンの結合様式を解明することにある。本年度の主な成果は次に示す如くである。1.小型化したHDVリボザイム系の大量合成3本のRNA鎖(基質成分8-mer、酵素成分16-merおよび35-mer)からなるHDVリボザイム系を設計した。基質成分については、化学合成により合成した。切断されない基質類似体として切断部位のシチジン残基の2^'-水酸基をメチル化した誘導体も合成した。酵素成分は、適当な鋳型DNAを用いT7RNAポリメラーゼによる転写反応を利用して調製した。2.マグネシウムイオン濃度の効果の分析リボザイムの構造および活性に及ぼすMg^<2+>イオン濃度の影響を、CDスペクトルの変化およびRNA鎖切断速度定数の変化を追跡することにより調べ、得られたデータをカーブフィッティング法により分析した。その結果、このリボザイムには、Mg^<2+>イオンは3個以上結合することが可能であり、RNA鎖切断活性を持つには2個以上のMg^<2+>イオンが必要であることが明らかになった。3.NMRによる解析NMRスペクトルの測定により、3本のRNAが実際に複合体を形成すること、およびMg^<2+>添加により複合体が構造変化を起こすことを明らかにした。2D NOESYスペクトルを測定することにより、シグナルの一部を帰属した。

The purpose of this study is to determine the activity of hepatitis virus (HDV) RNA enzyme (RNA cut-off) in order to determine the role of catalyst in the solution. It is necessary to use the combination of metal and metal to explain the activity of the catalyst. The results of this year's "main achievements" are as good as those of the year. 1. A large number of three copies of RNA (base component 8-mer, enzyme component 16-mer enzyme 35-mer) were synthesized in large quantities by miniaturization. The design of the HDV laboratory was designed. Basic components, chemical synthesis, chemical synthesis. Cut off the base of the body, cut the body, cut the part of the body, cut the residue 2 ^'- hydrate, change the synthesis of the body. The enzyme components and the DNA of Dangdang type use the words "T7RNA" and "Dang". two。 In this paper, the results of the analysis are as follows: in this paper, the results of the analysis are as follows: in the analysis of the temperature, the temperature, the The result of the test, the results of the test, the results of the test, the combination of three or more mg ^ & lt;2+> filters, and the RNA cut-off activity of more than two mg ^ & lt;2+> cycles, it is necessary to verify that it is necessary to verify the license. 3.NMR analysis of the NMR test data, 3 copies of the RNA copy of the international complex to form a complex, and the addition of the complex of mg ^ & lt;2+> to make a copy of the data. 2D NOESY measurement system is used to determine the size of each part of the system.

项目成果

Taiichi Sakamoto: "Properties of hepatitis δ virus ribozyme,which consists of three RNA oligomer strands" Journal of Biochemistry. 121. 1123-1128 (1997)

Taiichi Sakamoto：“由三个 RNA 寡聚体链组成的 δ 型肝炎病毒核酶的特性”《生物化学杂志》121. 1123-1128 (1997)。

Yoichiro Tanaka: "Structure-activity correlation for an HDV ribozyme composed of three RNA strands." Nucleic Acids Symposium Series. No.37. 309-310 (1997)

Yoichiro Tanaka：“由三条 RNA 链组成的 HDV 核酶的结构-活性相关性。”