肝炎デルタウィルスRNA型リボザイムの構造と作用機構

丁型肝炎病毒RNA型核酶的结构和作用机制

• 批准号: 10174211
• 负责人: 上杉 晴一
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Yokohama National University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10174211/
• 关键词: リボザイム; 肝炎デルタウィルス; RNA; 分子生物学; 金属酵素; 構造; NMR; CD

1. 3本のRNA鎖からなるHDVリボザイム(Rz1)のRNaseによる限定加水分解Rz1は、35-mer(1)および16-mer(2)よりなる酵素成分と8-mer(3)よりなる基質成分から構成されている。オリゴマー3の切断部位のシチジン残基の2'-OHをメチル化した切断されない基質アナローグを含むRz1複合体を10mMマグネシウムイオン存在下、水素結合していない一本鎖の部分に特異的なRNase T1およびRNase MB、2重鎖形成部分に特異的なRNaseVで限定加水分解を行い、ゲル電気泳動で分析した。その結果、Rz1はBeenらの提唱したブソイドノット型の2次構造をとり、ステムIIとステムIV間の接合部とステムIIIのループ部の2次構造が示唆された。2. NMRによる3本のRNA鎖からのRz1複合体形成の確認イミノプロトン領域のNMRスペクトルを測定し、複合体形成を確認した。オリゴマー1と2は、それぞれ単独で2次構造を形成していたが、混ぜ合わせると新しいシグナルが現れた。この酵素複合体にオリゴマー3を滴定して行くと、更にスペクトル変化が起こり、新しいシグナルも出現した。このRz1複合体の2次元NOESYスペクトルを測定すると、出現した2本のシグナルの間に強いNOEが見られ、基質と酵素の結合により生成が期待されるG:U塩基対に由来するものと思われた。3. NMRによるRz1複合体とマグネシウムイオンの結合の確認切断されない基質アナローグを含むRz1複合体にマグネシウムイオンを加えると、特定のシグナルに顕著な強度の変化と小さなケミカルシフトの変化が観察された。これにより、マグネシウムイオンの結合により全体の構造はあまり変化せず、居所的な変化にとどまる事が判った。

1. 3 this book, "RNA", "HDV", "RNase", "limited water decomposition of Rz1", "35-mer (1)", "16-mer (2)", "enzyme component" 8-mer (3), "basic composition", "chemical composition", "basic composition". In the 3-stage cut-off site, the 2'-OH residues were cut-off by the chemical method. In the presence of the Rz1 complex, the RNase T1 RNase MB, which is part of the special edition of the RNase complex, and the RNaseV that forms part of the complex, is limited to water decomposition, and the electrophoretic electrophoresis is used to analyze the characteristics. According to the results, Rz1

项目成果

Yoichiro Tanaka: "Structural investigation of HDV ribozymes by NMR spectroscopy" Nucleic Acids Symposium Series. No.39. 147-148 (1998)

Yoichiro Tanaka：“通过 NMR 光谱对 HDV 核酶进行结构研究”核酸研讨会系列。