肝炎デルタウィルスRNAリボザイム活性ドメインの構造研究

丁型肝炎病毒RNA核酶活性结构域的结构研究

• 批准号: 05265211
• 负责人: 上杉 晴一
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Yokohama National University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05265211/
• 关键词: リボザイム; RNA; 構造

1.HDVリボザイム活性ドメインの設計Beenらのプソイドノットモデルを参考にし、基質成分の13-mer、酵素部分の15-merおよび34-merの3本のRNAオリゴマー鎖からなる系を設計し、T7RNAポリメラーゼを用いた合成に必要なプロモーターおよびテンプレート部分の配列を含む2重鎖DNA(30、32、および51塩基対)を合成した。2.T7RNAポリメラーゼの大量調製T7RNAポリメラーゼ遺伝子を含むプラスミドを用い、大腸菌を利用してT7RNAポリメラーゼを大量に調製し、硫安沈澱および陽イオン交換クロマトグラフィーにより精製した。3.T7ポリメラーゼ系を利用したRNAオリゴマー合成条件の検討T7ポリメラーゼによるRNAオリゴマー合成の最適な反応条件を調べた。その結果、マグネシウムイオン濃度を、過剰に使用するヌクレオシド三リン酸の濃度とほぼ同じにすることが重要である事がわかった。4.RNAオリゴマーの合成上記の条件を用いて、RNAの合成を行い、ポリアクリルアミド電気泳動により分離精製し、3種類のRNAオリゴマーを得た。4.^<15>N標識したRNAオリゴマー合成の予備実験^<15>N標識したRNAの酵素的な加水分解とリン酸化により、標識したグアノシン三リン酸(GTP)を調製した。

1. The design of HDV protein activity matrix was studied. The 13-mer of matrix component, the 15-mer of enzyme component and the 34-mer of RNA sequence were designed. The T7RNA sequence was synthesized. 2. T7 RNA diversity is modulated in large quantities by T7RNA diversity, including the use of Escherichia coli, the use of T7RNA diversity, the use of thionine precipitation, and the use of cationic exchange. 3. The optimal conditions for T7 RNA synthesis are discussed by using T7 RNA synthesis method. The results of the study show that the concentration of the compound is higher than that of the compound. 4. RNA synthesis conditions, RNA synthesis, RNA purification, RNA purification 4.^ <15>RNA synthesis and <15>preparation of RNA enzymes for hydrolysis and acidification

项目成果

Osamu Odai: "Properties of a hammerhead-type RNA enzyme system that consists of three RNA strands" Nucleosides and Nucleotides. (in press). (1994)

Osamu Odai：“由三条 RNA 链组成的锤头型 RNA 酶系统的特性”核苷和核苷酸。

Masato katahira: "NMR studies of G:A mismatches in oligodeoxyribo-nucleotide duplexes modelled after ribozymes" Nucleic Acids Research. 21. 5418-5424 (1993)

Masato katahira：“以核酶为模型的寡脱氧核糖核苷酸双链体中 G:A 错配的 NMR 研究”《核酸研究》。

Masato katahira: "Structural studies of DNA and RNA containing AG base paiars by NMR" Nucleic Acids Symposium Series No.29. 203-204 (1993)

Masato katahira：“通过 NMR 对含有 AG 碱基对的 DNA 和 RNA 进行结构研究”核酸研讨会系列第 29 期。