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葉緑体RNAエディティング酵素の同定と作用部位認識機構

叶绿体RNA编辑酶的鉴定及作用位点识别机制

基本信息

批准号：
09278216
负责人：
廣瀬哲郎
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09278216/
关键词：
RNAエディティング葉緑体 in vitro系翻訳分子生物学

项目摘要

今年度は葉緑体のRNAエディティングの分子機構と生物学的意義について明らかにするため以下の事柄について解析を行った。1.葉緑体in vitroエディティング系を構築するため、特異的なヌクレオチド残基に標識を施したmRNAを調製し新たな鋭敏で簡便な検出法を確立した。またこの検出法を用いて、葉緑体抽出液の調製法、反応条件などを試行しエディティング様活性をTLC上で検出することに成功した。2.エディティング反応に必要なシス配列に関する情報を得るために全配列と転写マップが明らかになっているタバコ葉緑体において全エディティング部位の同定を試み、計32箇所のエディティング部位を同定した。またそれぞれの部位周辺の配列比較、種間における保存性についても解析を行い、各エディティング部位の部位特異性、種特異性に関する知見を得た。3.葉緑体in vitro翻訳系を用いてRNAエディティングが翻訳に与える影響について解析を行い、ndhDmRNAのRNAエディティングが翻訳開始に必須であること、組織特異的にエディティング効率が変化することにより翻訳をコントロールしていることを明らかにした(EMBO Jounalに発表)。rpoA MRNAのエディティング部位がRNAポリメラーゼαサブユニットの制御領域に存在することを見出し、エティティングと葉緑体転写制御の関連についての可能性を見出した。

This year, the molecular mechanism of chloroplast RNA is analyzed. 1. Chloroplast in vitro gene system construction, specific gene residues identification, gene modulation, simple and sensitive detection method established This method was successfully used in the preparation of chloroplast extract and reaction conditions. 2. All the necessary information about the arrangement of chloroplasts was obtained. 32 parts of chloroplasts were determined. The results show that there are some differences in the distribution of the parts, the relationship between species and conservation, the relationship between the parts and species, and the relationship between the parts and species. 3. Chloroplast in vitro transcription system uses RNA for transcription and analysis, ndhDmRNA RNA for transcription initiation must be determined, tissue-specific RNA for transcription initiation must be determined (EMBO Jounal). rpoA MRNA gene expression site was identified by RNA sequencing and the possibility of its existence in the control domain of chloroplast gene expression.