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哺乳類の核内exosomeによって制御されるRNA分子種の同定と機構解析

哺乳动物核外泌体调控的RNA分子种类的鉴定和机制分析

基本信息

批准号：
17770141
负责人：
廣瀬哲郎
金额：
$ 2.37万
依托单位：
National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

真核生物の遺伝子発現過程では、RNAの安定制御が最終的な発現量を決定する上で重要である。一方、多くのノンコーディングRNAは前駆体として合成された後、プロセシングによって成熟化する。これまでにRNAを3'→5'方向に分解するエクソヌクレアーゼが、エクソソームという巨大な複合体を形成し、細胞質と核それぞれに存在することが酵母において明らかになっていた。またこのうち核エクソソームに特異的な構成因子であるRrp6は、様々なRNAプロセシングや品質管理に関わる重要な因子であることが示されていた。本研究ではヒトのRrp6オーソログ(hRrp6)によって分解されるRNA種を特定し、酵母より複雑なRNAプロセシング系を有するヒト細胞におけるエクソソームの役割を明らかにすることを目標にした。まずhRrp6に対する特異的な抗体と高効率にノックダウンできるsiRNAを用いて、HeLa細胞においてhRrp6のノックダウンを行った。ノックダウン細胞からRNAを回収し、コントロールと共に各種RNAの蓄積量およびプロセシングパターンを解析したところ、核小体に局在するU3 snoRNA、マイクロRNA前駆体などがhRrp6のノックダウン細胞で多く蓄積していることを観察した。hRrp6の細胞内局在を抗hRrp6抗体を用いて解析したところ、多くが核小体に局在していることを確認した。さらに近年見つかったmRNA型ncRNAの発現へのエクソソームの関与を、ncRNAの発現を網羅的に解析できるマイクロアレイを用いて解析したところ、数十種類のncRNA様転写物の蓄積量が2倍以上に上昇していることを確認した。以上の結果から、hRrp6はヒト細胞でも核内に局在し、複数のRNA種のプロセシング及び分解に関与していることが示された。

The process of eukaryotic gene development, RNA stability control and the final amount of gene development are very important. A single, multi-species RNA is synthesized and matured. The RNA is decomposed in the direction of 3'→5' and the giant complex is formed. The cytoplasm and nucleus are separated and the yeast is separated. The key factors in RNA quality management are: In this study, we identified the specific RNA species that were decomposed by the Rrp6 gene (hRp6), yeast, and complex RNA species that were isolated from the cells. Specific antibodies to hRp6 and siRNAs with high efficiency were used in HeLa cells. The accumulation of RNA in the cells was analyzed and the nucleosomes were detected in the U3 snoRNA, hRp6 and hRp6 precursors. hRp6 and its intracellular structure were analyzed by anti-hRp6 antibody and confirmed by nucleosomes. In recent years, it has been confirmed that the accumulation of tens of kinds of ncRNA has increased by more than 2 times due to the analysis of mRNA expression and ncRNA expression. These results indicate that hRp6 is involved in the regulation and decomposition of multiple RNA species in the nucleus.

项目成果

期刊论文数量（8）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

RNAプロセシングを監視する核内RNA品質管理機構

监控 RNA 加工的核 RNA 质量控制机制

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
蛋白質核酸酵素 51
影响因子：
0
作者：
湯山耕平;山本直樹;柳澤勝彦;Yanagisawa K.;Yanagisawa K.;Yanagisawa K.;Yanagisawa K.;Yanagisawa K.;Tetsuro Hirose;井手上賢
通讯作者：
井手上賢

RNAプロセシングの進行を規定するRNPリモデリング

RNP 重塑调节 RNA 加工的进程