葉緑体RNAエディティング酵素の同定と作用部位認識機構
叶绿体RNA编辑酶的鉴定及作用位点识别机制
基本信息
- 批准号:10174217
- 负责人:
- 金额:$ 1.09万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
- 财政年份:1998
- 资助国家:日本
- 起止时间:1998 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
今年度は葉緑体のRNAエディティングの分子機構について明らかにするために以下の事柄について解析を行った。1. 昨年度開発に成功した葉緑体in vitro RNAエディティング系の諸条件を詳細に至適化し効率よく、再現性の高いin vitro系を確立した。RT-PCR法を用いてin vitroエディティング反応後の基質RNAから特異的cDNAを増幅し、プラスミドベクターにクローニング後DNA塩基配列解析をした結果、in vitroエディティング反応は正確なエディティング部位のみで起こっていることが確認された。2. in vitroエディティング系を用いてエディティングのシス配列とトランス因子の解析を行った。部位特異的変異や欠失変異を導入した基質RNA(psbL,ndhB mRNA)を合成しin vitroエディティング効率を測定したところ、エディティング配列上流16nt、下流10ntがpsbLのエディティングに重要であること、ndhBの場合は上流配列のみが重要で下流配列は必要ないことを見出した。RNAオリゴヌクレオチドを用いた競争阻害実験によりトランス因子がpsbLとndhB mRNAのエディティング部位上流に相互作用することを明らかにした。さらに交差競争阻害実験によりそれぞれのトランス因子は部位特異的であることを見出した。3. エディティング系のマイクロコッカルヌクレアーゼ処理、AMTクロスリンク法により、トランス因子は他のエディティング系で見出されているようなガイドRNAではなくタンパク質因子である可能性が高いことが示された。4. UVクロスリンク法によりエディティング部位とその上流近傍領域に特異的結合するRNA結合タンパク質の検出に成功した。以上の結果から全く未知であった葉緑体RNAエディティングの機構が明らかになり始めた。
This year's chloroplast RNA analysis of the molecular mechanism of the following things 1. The conditions for successful development of chloroplast in vitro RNA system were established in detail to optimize efficiency and reproducibility. RT-PCR method was used to amplify and amplify the specific cDNA of matrix RNA after retro-sequencing. Results of DNA base alignment analysis after retro-sequencing were confirmed. 2. In vitro, the analysis of the distribution and distribution of factors in the system The synthesis of matrix RNA(psbL,ndhB mRNA) was determined in vitro by site-specific mutation and mutation. The sequence of psbL mRNA was 16nt upstream and 10nt downstream. The sequence of psbL mRNA was important in the case of site-specific mutation. RNA is a competitive inhibitor of psbL and ndhB mRNA. The competition between the two sides is very important. 3.エディティング系のマイクロコッカルヌクレアーゼ处理、AMTクロスリンク法により、トランス因子は他のエディティング系で见出されているようなガイドRNAではなくタンパク质因子である可能性が高いことが示された。4. UV detection of RNA binding protein was successful in detecting RNA binding protein in the upstream region. The above results are unknown. Chloroplast RNA is unknown. The mechanism is unknown.
项目成果
期刊论文数量(3)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Tetsuro Hirose: "Tronslation of tobacco chloroplase vps14 mRNA depends on a Shine-Dalgarnc-like soquence in the 5'-untronslated region but not on internal RNA editing in the coding region" FEBS Letters. 430. 257-260 (1998)
Tetsuro Hirose:“烟草叶绿体 vps14 mRNA 的翻译依赖于 5-未翻译区域中的 Shine-Dalgarnc 样序列,但不依赖于编码区域中的内部 RNA 编辑”FEBS Letters。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Tetsuro Hirose: "The chloroplast infA gene with a UUG initiation codon" FEBS Letters. 445. 169-172 (1999)
Tetsuro Hirose:“带有 UUG 起始密码子的叶绿体 infA 基因”FEBS Letters。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Masahiro Sugiura: "Evolution and mechanism of translation in chloroplasts" Annual Review of Genetics. 32. 437-459 (1998)
Masahiro Sugiura:“叶绿体的进化和翻译机制”遗传学年度评论。
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- 作者:
- 通讯作者:
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