10SaRNAによるTrans-Translationの分子機構の解析

10SaRNA转译的分子机制分析

• 批准号: 09278217
• 负责人: 稲田 利文
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09278217/
• 关键词: Trans-Translation; Lacリプレッサー; 自己発現制御; 10SaRNA

平成9年度にTrans-Translationの役割について以下の研究成果を得た。1)lacリプレッサー発現制御におけるTrans-Translationの役割:lacリプレッサーの転写は、lacリプレッサーの下流に存在するlacオペレーターに結合するlacリプレッサーにより転写延長阻害(road-block)されることが知られている。この結果生成されるlacI mRNAには終止コドンを欠失したmRNAが含まれている。私は、終止コドンを欠失したlacImRNAにおけるTrans-Translationを見出した。このTrans-Translationは、活性型lacリプレッサーとlacオペレーターに依存し、lacリプレッサーの発現は自己制御されていた。さらに、Trans-Translationがlacリプレッサーの自己発現制御に必須であった。これらの結果により、生体内での遺伝子発現制御機構におけるTrans-Translationの役割が初めて明らかになった。2)10SaRNA挿入のシグナル:タグのアミノ酸配列を分解耐性なアミノ酸配列に変えた10SaRNA変異(ssrADD)と、10SaRNAにコードされたペプチドに対する抗体を用いて、Trans-Translationの産物をウエスタンにより同定する系を構築した。また、終始コドン直前に3種類のフレームシフト変異を導入したcrp遺伝子変異を作製した。ウエスタンとノーザン解析により、終始コドンを欠失した変異crpmRNAにおいてTrans-Translationが起こり、その結果タンパク質分解のみでなくmRNA分解も促進されることが明らかになった。

在1997年，就跨翻译的作用获得了以下研究结果。 1）反式翻译在调节LAC阻遏物表达中的作用：已知LAC阻遏物的转录是由LAC阻遏物与LAC阻遏物下游的LAC操作员结合的LAC阻遏物进行了封锁。所得的LACI mRNA包含删除终止密码子的mRNA。我在lacimrnas中发现了终止密码子的trans译。这种跨翻译取决于活性LAC阻遏物和LAC操作员，而LAC阻遏物的表达是自调节的。此外，跨翻译对于控制LAC阻遏物的自我表达至关重要。这些结果首次揭示了跨翻译在体内基因表达调节机制中的作用。 2）插入的信号：构建了一个系统，以使用10SARNA突变（SSRADD）来识别Western的跨翻译产物，其中TAG的氨基酸序列被转换为抗降解的抗降解氨基酸序列，并针对10sarna构造的肽的抗体。此外，还产生了CRP基因突变，其中在密码子之前不时引入了三种类型的翻新突变。西方和北部的分析表明，在整个密码子耗尽的突变体CRPMRNA中发生了跨翻译，因此不仅蛋白水解，而且促进了mRNA降解。

项目成果

M.H.Boris et al: "Catabolite repression by glacose-6-phosphate,gluconate and lactose in Escherichia coli" Mol.Microbiol.24. 857-867 (1997)

M.H.Boris 等人：“大肠杆菌中葡萄糖-6-磷酸、葡萄糖酸和乳糖对分解代谢物的抑制”Mol.Microbiol.24。

M.H.Boris et al: "luducer oxclusion by glucose-6-phosphate in E.coli by non-PTS Sugars." Mol.Microbiol.(1998)

M.H.Boris 等人：“大肠杆菌中的葡萄糖-6-磷酸盐被非 PTS 糖排除。”

K.Kimoto.et al: "CRP-CAMP plays a craciol rolein,glulose-lactose diauxie by actirating the glulose tronsporter gene in E.coli" Proc.Natl.Acad.USA. 94. 12914-12919 (1997)

K.Kimoto.et al：“CRP-CAMP 通过激活大肠杆菌中的葡萄糖转运蛋白基因，在葡萄糖-乳糖二元中发挥 craciol 作用”Proc.Natl.Acad.USA。

S.Dasgupta: "Geuetic uncoupling of the as-RNA-binding are RNA clearage activities of the E.coli RNAseIII." Mol.Microbiol.(1998)

S.Dasgupta：“as-RNA 结合的 Geutic 解偶联是大肠杆菌 RNAseIII 的 RNA 清除活性。”