DNA結合能を有するキネシン様蛋白質Kidの染色体分配における機能

Kidは、細胞内輸送蛋白質キネシンのモーター領域と相同性のある配列と、DNA結合能をあわせ持つ蛋白質である。これまでの解析から-、Kidは、細胞周期のM期後期に、染色体のセントロメア付近に存在することが、間接蛍光染色法により示されている。又、KidのDNA結合領域を細胞に高発現させると、染色体凝集や、紡錘体の形成に異常がみられる。これらのことから、KidのDNA結合能が染色体分離に重要であると推察される。そこで、Kidが認識する塩基配列を決定することを試みた。まず、PCRを応用した結合配列選別法(BSS法)を行い、合成ランダムオリゴヌクレオチドのプールの中から、Kidに特異的に結合する配列を分離した。その結果、Kidが結合するコンセンサス塩基配列を推定することが出来た。この配列は、セントロメアに繰り返し存在するa-サテライトDNAや、今までにKidが結合することが知られている、EBウイルスのoriPや、c-erbB2のプロモーター領域にも存在することが確認された。次に、Kidがセントロメアに存在するa-サテライトDNAに結合することを想定し、a-サテライトDNAをサブクローニングした。それらを、ゲルシフト法を用いて解析したところ、a-サテライトDNAにKidが結合することが明らかとなった。これらの結果から、Kidは、細胞分裂後期において、直接、染色体のセントロメア領域に結合して、染色体分配に関与する可能性が示唆された。

Kidは、細胞内輸送蛋白質キネシンのモーター領域と相同性のある配列と、DNA結合能をあわせ持つ蛋白質である。これまでの解析から-、Kidは、細胞周期のM期後期に、染色体のセントロメア付近に存在することが、間接蛍光染色法により示されている。又、KidのDNA結合領域を細胞に高発現させると、染色体凝集や、紡錘体の形成に異常がみられる。これらのことから、KidのDNA結合能が染色体分離に重要であると推察される。そこで、Kidが認識する塩基配列を決定することを試みた。まず、PCRを応用した結合配列選別法(BSS法)を行い、合成ランダムオリゴヌクレオチドのプールの中から、Kidに特異的に結合する配列を分離した。その結果、Kidが結合するコンセンサス塩基配列を推定することが出来た。この配列は、セントロメアに繰り返し存在するa-サテライトDNAや、今までにKidが結合することが知られている、EBウイルスのoriPや、c-erbB2のプロモーター領域にも存在することが確認された。次に、Kidがセントロメアに存在するa-サテライトDNAに結合することを想定し、a-サテライトDNAをサブクローニングした。それらを、ゲルシフト法を用いて解析したところ、a-サテライトDNAにKidが結合することが明らかとなった。これらの結果から、Kidは、細胞分裂後期において、直接、染色体のセントロメア領域に結合して、染色体分配に関与する可能性が示唆された。