DNA結合蛋白質によるDNA構造変化の視覚化

DNA 结合蛋白引起的 DNA 结构变化的可视化

• 批准号: 08640790
• 负责人: 廣川 秀夫
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Sophia University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08640790/
• 关键词: DNA・タンパク質結合構造; DNA電顕; ディタ-ジェント展開法; ファージφ29

バクテリオファージφ29DNAは両5'末端に分子量30KDのタンパク質を共有結合したDNA・タンパク質複合体として抽出精製される。この複合体の電子顕微鏡像としての視覚化を指標にして,種々のDNA展開剤の効果,展開法を検討した。チトクロームCを標準の展開剤として,カチオニック ディタ-ジェント[beuzyldimethylalkylammonium chroride(BAC),cetylpyridium chlride(Cp)]および非イオン性ディタ-ジェント[2,4,6-Tri(demethyl-aminomethyl)phenol,(DMP-30)]を用いた。マイカの新開裂面にカーボン膜を蒸着した膜面にDNAを上記展開剤とを混合した溶液を直接吸着する方法と,DNA・展開剤混液を純水表面上に展開する方法を比較した。前者の方法は、原子間力顕微鏡観察に利用される方法であるが,DNA・蛋白質複合体がカーボン膜に吸着した後,カーボン膜をマイカからはく離後、透過型電顕試料として利用することに成功した。後者の水面上の展開法は,DNA溶液のイオン濃度および温度により,影響を受け易く,DNA像がしばしばゆがめられる(キンク状)ことを経験した.しかしながら,最適条件下では,φ29DNA両末端に結合したタンパク質像を観察することに成功した.さらに,制限酵素Hind III処理されたDNA断片の末端にHind IIIタンパク質と考えられる構造を明らにすることが出来た。京大・ウイスル研・和田助教授との共同研究による大腸菌陰性因子F'上のイチロンにRepE54タンパク質が結合した結果,生じると考えられるロリ-ポップ構造を捉えることに成功した。この構造をディタ-ジェント展開法により,RepE45結合像の視覚化を試みている。

The molecular weight of the 5 'end of φ 29DNA was determined by the molecular weight of 30KD. The molecular weight of 30KD was determined by the combination of molecular weight, molecular weight, molecular weight and molecular weight. The microphone of the complex computer is like a microphone, and a variety of DNA is used to develop the results, and the method is developed. In the first place, the standard has been developed, and the standard [beuzyldimethylalkylammonium chroride (BAC), cetylpyridium chlride (Cp)] has been used for the treatment of non-invasive sex drugs [2, 4, 4, Cp, (DMP-30)]. On the surface of the new crack surface, the thin film is steamed. On the surface of the DNA, the mixed solution is directly absorbed by the method, and the DNA is developed on the surface of the water. In the former method, the atomic force micrograph was used to determine the temperature, and the DNA protein complex was used to adsorb the membrane. After the absorption of the membrane, the permeable electrical materials were successfully tested by the electron microscope. The latter is spread out on the surface of the water, and the temperature of the DNA solution is different from that of the temperature, so that the DNA is easy to be affected by the temperature, and the DNA is like a torso. Under the most favorable conditions, the end of the φ 29DNA system is in combination with each other. The results show that the system is successful. To make the enzyme Hind III, the end of the DNA fragment is the Hind III fragment. Assistant Professor Hotan of Beijing University co-studied the sex factor of bacteria F'. The results of the combination of the results of the combination of the results of the study of the sex factor F', the RepE54 sex factor, the sex factor, the sex factor, In order to improve the performance of the system, the combination of the RepE45 is like a demonstration of the system.

项目成果

Yamaguchi,M.,Hirokawa,H.Sugahara,K.,Mizokami,H.,Takeo,K.: "Electron microscopy of biological specimens by the plesma-polymerization rapid-breeze replica method" J.Electron Microsc.(印刷中). (1997)

Yamaguchi, M.、Hirokawa, H. Sugahara, K.、Mizokami, H.、Takeo, K.：“通过等离子体聚合快速微风复制方法对生物样本进行电子显微镜检查”J. Electron Microsc（出版中）。 (1997)

廣川秀夫: "分担執筆第5章細菌ウイルス学各論,5-5バクテリオファージφ29,M2ゲノムの複製:プロティンプライミングDNA複製「ウイルス学」畑中正-編" 朝倉書店(印刷中), (1997)

Hideo Hirokawa：“撰稿人第 5 章：细菌病毒学的细节，噬菌体 φ29 的 5-5 复制，M2 基因组：蛋白质引发 DNA 复制‘病毒学’，由 Masaru Hatanaka 编辑”朝仓书店（正在出版），（1997 年）