シトクロムP-450の酵素化学的並びに臓器特性

细胞色素 P-450 的酶化学和器官特性

• 批准号: 01635505
• 负责人: 市川 佳幸
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kagawa Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-01635505/
• 关键词: シトクロムP-450; モノオキシゲナ-ゼ; ステロイドホルモン; コレステロ-ル側鎖切断酵素; アドレノフェレドキシン

各種高等動物(ウシ、ブタ、ヒツジ等)の副腎皮質ミトコンドリアよりシトクロムP-450scc(コレステロ-ル側鎖切断酵素)を精製し、単一蛋白として取り出した。加えてこの還元酵素系であるNADPH-フェレドキシン還元酵素やフェレドキシンもそれぞれ単一蛋白として精製した。シトクロムP-450sccに関しては、その酵素化学的特性について研究を行った。シトクロムP-450sccは、ミトコンドリア型のP-450であるため、副腎皮質のアドレノフェレドキシンと結合を形成するが、この際シトクロムP-450scc-イソシアニッド結合体はこのアドレノフェレドキシンにより分光吸収スペクトルが著明に影響され、シトクロムP-450scc-イソシアニッドの還元型のソレ-帯の2つの吸収(425nmと455nm)は455吸光度が減少し、425吸光度が増加することが分かった。このことは、シトクロムP-450sccが生理機能を発揮するためにはアドレノフェレドキシンによるP-450sccのヘム結合領域の形態変化が必要であることを示唆している。シトクロムP-450sccは前述のごとくアドレノフェレドキシンと結合体を形成するが、シトクロムP-450scc表面上のアドレノフェレドキシン結合部位はPLP(ピリドキサ-ル隣酸)と特異的に結合するリジン残基があり、PLPを結合させることによりこの結合ドメインをトリプシンにより切り取ることが出来る。このポリペプチドの一次構造を決定した。この部位はN末端より329〜342番目に存在していることが証明された。シトクロムP-45011βもミトコンドリア型のP-450であるため、アドレノフェレドキシンと結合する。従ってシトクロムP-45011βにも極めて類似性の高い部位の存在が証明された。シトクロムP-450sccアドレノフェレドキシンやNADPH-フェレドキシン還元酵素の各抗体を作成し、脳におけるシトクロムP-450scc-モノオキシゲナ-ゼの存在部位を決定した。

All kinds of higher animals (ウ シ, ブ タ, ヒ ツ ジ etc) の adrenal cortex ミ ト コ ン ド リ ア よ り シ ト ク ロ ム P - 450 SCC (コ レ ス テ ロ - ル side chain to cut off the enzyme) を refined し, a protein と 単 し て take り out し た. Add え て こ の is yuan enzyme system で あ る NADPH - フ ェ レ ド キ シ ン also yuan enzyme や フ ェ レ ド キ シ ン も そ れ ぞ れ 単 a protein と し て refined し た. シ ト ク ロ ム P - 450 SCC に masato し て は, そ の characteristics of enzyme chemistry に つ い を line っ て research た. シ ト ク ロ ム P - 450 SCC は, ミ ト コ ン ド リ ア type の P - 450 で あ る た め, adrenal cortex の ア ド レ ノ フ ェ レ ド キ シ ン と combined を form す る が, こ の interstate シ ト ク ロ ム SCC - P - 450 イ ソ シ ア ニ ッ ド combination は こ の ア ド レ ノ フ ェ レ ド キ シ ン に よ り spectral absorption 収 ス ペ ク ト ル が Ming に's influence さ れ, シ ト ク ロ ム SCC - P - 450 イ ソ シ ア ニ ッ ド の type also yuan の ソ レ - 帯 の 2 つ の 収 absorption (425 nm 455 nm) と は 455 absorbance が し, 425 absorbance が raised plus す る こ と が points か っ た. こ の こ と は, シ ト ク ロ ム P - 450 SCC が physiology を 発 swing す る た め に は ア ド レ ノ フ ェ レ ド キ シ ン に よ る P - 450 SCC の ヘ ム の form - combining fields が necessary で あ る こ と を in stopping し て い る. シ ト ク ロ ム P - 450 SCC は aforesaid の ご と く ア ド レ ノ フ ェ レ ド キ シ ン と combination を form す る が, シ ト ク ロ ム P - 450 SCC surface の ア ド レ ノ フ ェ レ ド キ シ ン combining site は PLP (ピ リ ド キ サ - ル 隣 acid) と specific に combining す る リ ジ ン residues が あ り, PLP を combining さ せ る こ と に よ Combine ドメ をトリプシ をトリプシ をトリプシ によ によ によ to take る とが とが とが out る. The construction of を in one go determines た. こ の parts は N terminal よ り time of 329 ~ 342 mesh に exist し て い る こ と が prove さ れ た. シ ト ク ロ ム P - 45011 beta も ミ ト コ ン ド リ ア type の P - 450 で あ る た め, ア ド レ ノ フ ェ レ ド キ シ ン と combining す る. Youdaoplaceholder0 ロム ロムP-45011βに <s:1> extremely めて similar <s:1> high <s:1> part <e:1> exists が proof された. シ ト ク ロ ム P - 450 SCC ア ド レ ノ フ ェ レ ド キ シ ン や NADPH - フ ェ レ ド キ シ ン enzyme の is yuan each antibody を し, consummate 脳 に お け る シ ト ク ロ ム SCC - P - 450 モ ノ オ キ シ ゲ ナ - ゼ の is part を decided し た.

项目成果

Hamamoto,I.,Tanaka,T.,Maeba,T.,Chikaishi,K.and Ichikawa,Y.: "Microsomal eytochrome P-450-linked monooxygenase systems and lipid composition of human hepatocellular carcinoma" Br.J.Cancer. 59. 6-11 (1989)

Hamamoto,I.、Tanaka,T.、Maeba,T.、Chikaishi,K. 和 Ichikawa,Y.：“微粒体细胞色素 P-450 连接的单加氧酶系统和人肝细胞癌的脂质组成”Br.J.Cancer。

Tsubaki,M.,Iwamoto,Y.,Hiwatashi,A.and Ichikawa,Y: "Inhibition of electron transfer from adrenodoxin to cytochrome P-450scc by chemical modification with pyridoxal 5'-phosphate:identification of adrenodoxin-binding site of cytochrome P-450scc" Biochemistry

Tsubaki，M.，Iwamoto，Y.，Hiwatashi，A. 和 Ichikawa，Y：“通过 5-磷酸吡哆醛化学修饰抑制从肾上腺素还蛋白到细胞色素 P-450scc 的电子转移：细胞色素 P 肾上腺素还素结合位点的鉴定

Hamamoto,I.,Kurokohchi,K.,Tanaka,S.and Ichikawa,Y.: "Adrenoferredoxin-binding peptide of NADOH-adrenoferredoxin reductase." Biochem.Biophys.Acta. 953. 207-213 (1988)

Hamamoto,I.、Kurokohchi,K.、Tanaka,S. 和 Ichikawa,Y.：“NADOH-肾上腺铁氧还蛋白还原酶的肾上腺铁氧还蛋白结合肽。”

Tsubaki,M.,Hiwatashi,A.,Ichikawa,Y.,Fujimoto,Y.,Ikekawa,N.and Hori,H.: "Electron parmagnetic resonance study of ferrous cytochrome P-450scc-nitric oxide complexes:effects of 20(R),22(R)-dihydroxy-cholesterol and reduced adrenodoxin." Biochemistry. 27. 485

Tsubaki，M.，Hiwatashi，A.，Ichikawa，Y.，Fujimoto，Y.，Ikekawa，N.和Hori，H.：“亚铁细胞色素P-450scc-一氧化氮复合物的电子顺磁共振研究：20（的影响）

Sakihama,N.,Hiwatashi,A.,Miyatake,A.,Shin,M.and Ichikawa,Y.: "Isolation and purification of mature bovine aduenocortical ferredoxin with an elogated carboxyl end." Arch.Biochem.Biophys.264. 23-29 (1988)

Sakihama,N.、Hiwatashi,A.、Miyatake,A.、Shin,M. 和 Ichikawa,Y.：“具有延长的羧基末端的成熟牛腺皮质铁氧还蛋白的分离和纯化。”