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カリクレインによる血中で生成されるPGI_2生産促進ペプチドの分離同定と作用機構

激肽释放酶血液中PGI_2促产肽的分离鉴定及作用机制

基本信息

批准号：
01637503
负责人：
室田誠逸
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-01637503/
关键词：
プロスタサイクリン PGI_2 血管内皮細胞カリクレイン

项目摘要

カリクレインはセリンプロチア-ゼであり血清中のキニノ-ゲンを基質としてリジルブラディキニン、ブラディキニンを産生する酵素である。私達はカリクレインのウシ動脈由来内皮細胞におけるプロスタサイクリン(PGI_2)合成促進作用が、前述したキニンの生産を介さず、新規ペフチドを産生する可能性を見い出した。血管内皮細胞にカリクレインを長時間作用させるとそのPGI_2合成促進作用は少なくとも24時間は持続した。しかし反応途中で細胞層を洗うか、もしくはカリクレインの阻害剤を加えるとそのPGI_2合成促進効果が失われた。したがって、新規ペプチドはカリクレインにより常に産生されながらPGI_2合成促進作用を発揮していると考えられる。本度はこの新規ペプチドの構造決定を試みた。血清の硫安沈殿を行い、40〜50%飽和画分にカリクレインを加え37℃で1時間インキュベ-トした。反応液をセントリコン-10にかけて遠心分離し、低分子画分をさらにHPLCを用いて分画した。カリクレイン処理によって新たに出現した5つのピ-クについて、それぞれさらにHPLCを用いて精製した。それぞれはアミノ酸4〜7個から成るペプチドであった。それらの構造決定を行ったのち、新規にそれぞれのペプチドを化学合成し、その活性を調べたが、活性は保持されていなかった。おそらく硫安分画時にプロテア-ゼも濃縮され、一部消化されてしまったためと思われた。さらに工夫をこらし、精製を行っている段階である。血管内皮細胞においてカリクレインによるPGI_2合成の促進効果は、タンパク合成阻害剤では抑制されないがブランディキニンのそれは抑制されることから、本ペプチドとブランディキニンの作用機作は本質的に異なるものと思われる。

The enzyme is produced by the enzyme in the blood. The possibility of promoting the synthesis of PGI_2 from endothelial cells, the production of PGI_2, and the production of PGI_2 from endothelial cells were also discussed. The effect of PGI_2 synthesis on vascular endothelial cells was studied for a long time. On the way back, the cell layer is washed away, and the protective agent of moshiwa is added, and the PGI_2 synthesis promoting effect is lost. The new regulation of PGI_2 synthesis promotes the development of PGI_2 synthesis. This is the first time that the new rules have been adopted. The serum sulfur concentration is 40~50% saturated, and the temperature is 37 ℃ for 1 hour. HPLC is used for the separation of low molecular weight fractions and high molecular weight fractions. The new process was developed by HPLC. 4 to 7 The structure of the compound is determined by the chemical synthesis of the compound, and the activity of the compound is maintained. The first part of the book is about digestion. In the middle of the day, the work is done carefully. The promotion effect of PGI_2 synthesis in vascular endothelial cells is opposite to that of inhibition of PGI_2 synthesis in vascular endothelial cells.