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培養系による中枢神経細胞の傷害機序とその制御に関する研究

利用培养系统研究中枢神经细胞损伤机制及其控制

基本信息

批准号：
03263207
负责人：
室田誠逸
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03263207/
关键词：
神経細胞グルタミン酸神経細胞死 NMDA 海馬

项目摘要

興奮性アミノ酸による神経細胞障害は、虚血性脳障害、頭部外傷などの中枢性疾患に深く関与しているが、そのメカニズムはいまだ仮説の域を出ない。我々は独自の神経細胞培養系を用いて新しい神経細胞死判定系を開発すると共に、薬剤による神経細胞死の予防に関する検討を試みた。神経細胞の培養には胎児脳からのPrinsary cultureを使用せざるを得ないが、常にin vivoとの対比が問題となる。興奮性アミノ酸の影響を検討する際にはその受容体の発現が重要であるため、可及的長期の培養が必要である。このためにはグリア細胞との共存が必要である。我々はグリア細胞の上にカバ-グラスを置きその上に胎児脳細胞を蒔くことにより、2週間前後に渡る神経細胞優位の培養を可能とした。この培養系を用いて興奮性アミノ酸による神経細胞障害を調べる目的で,画像解析装置付き蛍光顕微鏡ACASー507による新しい神経細胞死判定系の開発を試みた。既に神経細胞死は色素排除法や培養液中の酵素測定などによって判定されているが、迅速性、正確性などいくつかの問題点が指摘されている。我々は蛍光発色に生細胞内エステラ-ゼを必要とする蛍光色素FDA、及び細胞膜障害に伴って細胞内に入り蛍光を獲得するPIを用いて上述の問題点を解決した。これにより、数分以内での正確な神経細胞死の判定が可能となった。上述の判定系を用いて新しく合成された薬剤の効果判定を行ったところ、興奮性アミノ酸投与後における処理開始にも有効性が認められた。Fura‐2を用いた細胞内カルシウム測定によって細胞内カルシウム流入の阻害がその作用機序であろうと推測された。以上の様に本assay系は神経細胞死判定のみならず、治療薬の開発、神経細胞死に至るメカニズムの解明に大きな役割を果たすことが期待される。

Excitatory acid damage to nerve cells, blood deficiency damage, head injuries, and other central disorders are deeply related to these disorders. We are trying to develop a new system for determining the death of neurons by using our own neuronal cell culture system. In the culture of neural cells, there are many problems in the use of Prinsary culture, especially in vivo. When the effects of excitatory acid are discussed, it is important to develop the receptor and it is necessary to cultivate it for a long time. This is the first time I've ever seen a woman. The cells were cultured in the optimal position for 2 weeks. For the purpose of regulating the damage of neurons by using the medium excitatory acid in the culture system, the image analysis device was equipped with a light microscope ACAS-507 to develop a new system for determining the death of neurons. The method of eliminating pigment from nerve cells and enzyme determination in culture medium can be used to determine the quality, rapidity and legality of enzyme determination. We need to get rid of the pigment FDA and the cell membrane barrier. It is possible to accurately determine the death of nerve cells within a few minutes. The above determination is based on the determination of the effect of the new compound, the excitation of the compound, and the initiation of the treatment. The mechanism of action of Fura‐2 in the intracellular cell flow inhibition assay was postulated. These assays are intended for the detection of neuronal death, the development of therapeutic agents, the detection of neuronal death, and the detection of neuronal death.