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酵母の高誘導性チトクロ-ムPー450の発現調節機構

酵母中高度诱导型细胞色素 P-450 表达的调节

基本信息

批准号：
02217205
负责人：
高木正道
金额：
$ 1.15万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

nーアルカンを単一炭素源,エネルギ-源として生育できる酵母であるCandida maltosaは炭素源がnーアルカンの時,チトクロ-ムP450遺伝子の発現がonになり,ミクロソ-ムにP450を蓄積する。この酵素はnーアルカンの初発酸化酵素として働く。この現象は疎水性物質による真核生物遺伝子の発現調節機構の解明に適していると考えた。私はこのP450をnーアルカン培養C・naltosa細胞より精製し,その部分的アミノ酸配列を決定し,その遺伝子を単離し配列を決定し,CYP52A3と命名した。その配列から推定されるP450のアミノ酸配列は既知のものと共通部分を持ちP450superfamilyの一員と考えられる。一方、この遺伝子の発現調節の解析に必要なC・maltosaの宿主ーベクタ-系を完成させた。この系を用いてCYP52A3遺伝子の上流にあってnーアルカンによる発現調節に関与している領域を特定することを研究の主な目的とした。まずC・naltosaの細胞内で活性を検出しやすい酵素の遺伝子としてCーADE1をリポ-タ-遺伝子として選び、その上流にCYP52A3の上流の種々の領域を連結し,C・maltosaに導入し,炭素源を変化させた時のCーADE1の活性を測定した。特にnーアルカンによる正の,グルコ-スによる負の調節に関与する領域をそれぞれ決定した。またCYP52A3DNAをプロ-ブとして用いた実験により,C・maltosaのゲノム中に非常に相同性の高い遺伝子がもう1つ存在することを見出した。この遺伝子を単離し配列を決定したところCYP52A3のallelic遺伝子であることがわかった。これら2種の遺伝子をin vivoでの相同性組換えを利用して破壊した株を作ったが、2の株もまだnーアルカン資化能を有していた。これはC・maltosaゲノム中にCYP52関連多重遺伝子群が存在し、発現しているためであると結論した.

nーアルカンを単一carbonsu source,エネルギ-source として生できるYeast であるCandida maltosa charcoal source がnーアルカンの时, チトクロ-ムP450 伝子の発appears がonになり, ミクロソ-ムにP450を accumulates する.このzyme はnーアルカンのInitial acidification enzyme として働く. The phenomenon of water-based substances is explained by the regulation mechanism of eukaryotic organisms. Private P450をnーアルカン cultured C・naltosa cell purified, part of The combination of アミノ acid is determined, the combination of その缝子を単し is determined, and the name of CYP52A3 is した. It is presumed that the P450 P450 acid combination is a common part of the known P450superfamily. One party, この缝子の発 appear to adjust the analysis of the necessary なC・maltosa のhost ーベクタ-system をComplete させた.この线を Use いてCYP52A3缝子の上流にあってnーアルカンによThe main purpose of the current regulation and the specific field of research is the main purpose of the research.まずC・naltosaのActivity in cellsを検出しやすいEnzymeの伝子としてCーADE1をリポ-タ-缝子として选び、その上流にThe upstream species of CYP52A3 is connected to the field, C・maltosa is introduced, and the carbon source is changed and the activity of C ADE1 is measured.特にnーアルカンによる正の,グルコ-スによるnegativeのadjusted and する区をそれぞれdeterminedした.またCYP52A3DNAをプロ-ブとして用いた実験により,C・maltoのゲノム中に Very sameness の高い伝子がもう1つ Existence することを见出した.この伝子を単里し合组をdeterminationしたところCYP52A3のallelic 伝子であることがわかった.これら2 kinds of の伝子をin Vivo is the same as the combination of the use of the して壊した strain を Make ったが, 2 の strain もまだn ーアルカン capitalization を有しいた.これはC・maltosaゲノム中にCYP52-related multiple genetic subgroups がexistenceし、発 appearしているためであるとconclusionした.