Cadida酵母の発現ベクタ-を用いた難分解性物質分解系の開発

使用念珠菌酵母表达载体开发持久性物质降解系统

• 批准号: 01602503
• 负责人: 高木 正道
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-01602503/
• 关键词: Candida酵母; 発現ベクタ-; 分解酵素系遺伝子; 環境汚染物質

1)異種遺伝子をCandida maltosaに導入して発現させるため、まず宿主ベクタ-系の改良を行った。これまではC.maltosa(Leu^-)株を宿主として用い、Leu2遺伝子をマ-カ-に持つベクタ-を利用して来たが、この宿主は最少培地での生育が悪いなどの問題があった。そこで、C.maltosa(His^-)株、C.maltosa(Ade^-)株、さらにC.maltosa(His^-,Ade^-)株を宿主として、これらを相補する遺伝子C-His5,C-ADE1遺伝子をクロ-ン化し、それらのヌクレオチド配列を決定した。その結果、新たに3系列の宿主・ベクタ-系が確立させ、優良な宿主を用いた遺伝子操作の場が完成された。2)細菌由来の異種遺伝子をC.maltosa中で発現させるためにはC.maltosa内で高い発現を示すプロモ-タ-を得る必要がある。そのためまずプロモ-タ-検索ベクタ-を構築し、次にこれを用いて、C.maltosaゲノム中より数種のベクタ-用プロモ-タ-を単離した。これらを用いC.maltosaでの発現ベクタ-を完成させた。3)一方、環境汚染物質の分解系遺伝子としては、Pseudomonasのポリ塩化ビフェニル(PCB)分解に関与するものを用いた。すでに我々がPCBヌクレオチド配列を決定した。これら遺伝子の中から、2,3-ジヒドロキシビフェニルジオキシゲナ-ゼをコ-ドするものを取り出した。その前後のヌクレオチド配列を改変してC.maltosaの発現ベクタ-に挿入可能にし、連結した。このようにして作製したベクタ-をC.maltosaに導入し、2,3ジヒドロキシビフェニルジオキシゲナ-ゼの発現をコロニ-黄色化法で検定している。

1) heterogeneous legacy 伝 son を Candida maltosa に import し て 発 now さ せ る た め, ま ず host ベ ク タ - line is の improved を っ た. こ れ ま で は c. altosa (Leu ^ -) strains を host と し て い, Leu2 posthumous son 伝 を マ カ - に hold つ ベ ク タ - を using し て to た が, こ の は host at least the petty で の fertility が 悪 い な ど の problem が あ っ た. そ こ で, c. altosa (ihs ^ -) strains, c. altosa (Ade ^ -) strains, さ ら に c. altosa (ihs ^ -- Ade ^ -) strains を host と し て, こ れ ら を phase fill す る heritage 伝 sub - His5 C, C - ADE1 posthumous son 伝 を ク ロ - ン し, そ れ ら の ヌ ク レ オ チ ド column Youdaoplaceholder0 decides that た. そ の results, new た に 3 series の host · ベ ク が タ - department establish さ せ, fine な host を い た heritage 伝 sub operations の field が complete さ れ た. 2) bacteria origin の heterogeneous legacy 伝 son を c. altosa in で 発 now さ せ る た め に は c. altosa で within high い 発 を now shown す プ ロ モ タ - を る necessarily が あ る. そ の た め ま ず プ ロ モ タ - 検 cable ベ ク タ - を constructing し, に こ れ を with い て, c. altosa ゲ ノ ム in よ り several の ベ ク タ - use プ ロ モ タ - を 単 from し た. Youdaoplaceholder5 れらを is accomplished by using れらを c. maltosaで で ベ タ-を. 3) one party, decomposition of environmental pollutants の heritage 伝 son と し て は, Pseudomonas の ポ リ salt chemical ビ フ ェ ニ ル (PCB) decomposition に masato and す る も の を with い た. Youdaoplaceholder0 I 々がPCBヌ レ レ チド チド チド arrangement を decide on た. こ れ ら heritage 伝 child の か ら, 2, 3 - ジ ヒ ド ロ キ シ ビ フ ェ ニ ル ジ オ キ シ ゲ ナ - ゼ を コ - ド す る も の を take り out し た. Before and after そ の の ヌ ク レ オ チ ド match column を change - し て c. altosa の 発 now ベ ク タ - に scions into possible に し, link し た. こ の よ う に し て cropping し た ベ ク タ - を c. altosa に import し, 2, 3 ジ ヒ ド ロ キ シ ビ フ ェ ニ ル ジ オ キ シ ゲ ナ - ゼ の 発 now を コ ロ ニ - yellow polarization method で 検 set し て い る.

项目成果

高木正道: "Purification of cytochrome P-450alk from n-alkane-grown cells of Candida maltosa,and cloning and nucleotide sequencing of the encoding gene." Agric.Biol.Chem.53. 2217-2226 (1989)

Masamichi Takagi：“从正烷烃生长的麦芽糖念珠菌细胞中纯化细胞色素 P-450alk，以及编码基因的克隆和核苷酸测序。”53 (1989)。

高木正道: "Construction of promoter-probe vectors for Candida maltosa,and n-alkane-assimilating yeast,using the LEU2 gene of Saccharomyces cerevisiae." J.Basic Microbiol.28. 335-342 (1988)

Masamichi Takagi：“使用酿酒酵母的 LEU2 基因构建麦芽糖念珠菌和正烷烃同化酵母的启动子探针载体。”J.Basic Microbiol.335-342（1988）。

金原和秀: "Cloning and sequencing of two tandem genes involved in degradation of 2,3-dihydroxybiphenyl to benzoic acid in the polychlorinated biphenyl-degrading soil bacterium Pseudomonas sp.strain KKS102." J.Bacteriol.171. 2740-2747 (1989)

Kazuhide Kanehara：“在多氯联苯降解土壤细菌假单胞菌菌株 KKS102 中将 2,3-二羟基联苯降解为苯甲酸的两个串联基因的克隆和测序（J.Bacteriol.171）。”

引地健司: "An improved host-vector system for Candida maltosa using a gene isolated from its genome that complements the his4 mutation of Saccharomyces cerevisiae." Curr.Genet.16. 261-266 (1989)

Kenji Hikichi：“使用从其基因组中分离出的基因来改进麦芽糖酵母的宿主载体系统，该基因补充了酿酒酵母的 his4 突变。”1989 年。