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トマトSタンパク質の酵母を用いた分泌生産系の構築と花粉管伸長阻害機作の解析

番茄S蛋白酵母分泌生产体系的构建及花粉管伸长抑制机制分析

基本信息

批准号：
08273206
负责人：
高木正道
金额：
$ 1.02万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08273206/
关键词：
トマト S-RNase 酵母分泌系自家不和合性 S-座位

项目摘要

(1)目的野生種トマトが持つ自家不和合性の機構を解明する一助として、(a)既に単離している自家不和合性に関わるS遺伝子由来のcDNAを用いて、異種宿主において組換えS RNaseを生産する、及び(b) S遺伝子を含むS-locusの遺伝子の発現や機能を知る。(2)研究成果a-1.大腸菌を宿主として用いた場合、グルタチオンS-トランスフェラーゼおよびヒスチジンタグとの融合蛋白質として細胞内に発現させることに成功した。a-2.Saccharomyces cerevisiaeを宿主に用いるものについては、現在のところ実験が進行中である。a-3.昆虫細胞Sf9を宿主にして、RNAP-1のプレプロ配列を用いた場合、発現誘導をかけた細胞内に予想分子量のバンドが認められた。S糖蛋白質本来のシグナル配列を用いた場合、発現の誘導をかけた培養上清とネガティブコントロールとの間に差が認められた.b-1.S遺伝子を含む20kbpの中で自家不和合性に関わるS RNase以外の転写産物を探すため、20kbpのS遺伝子を4つの領域にわけ、それぞれをprobeとしてNorthern解析を行った結果、S RNaseの遺伝子から12kbp上流に花柱組織特異的に発現している約2kbpの転写産物を見つけた。この領域に含まれる3kbpのgenomic遺伝子の塩基配列を決定し、EMBLのdata baseからこの遺伝子と相同性がある産物を探したが、相同性がある産物はなかった。b-2.トマト由来のS_<11>RNaseのgenomic DNAを自家和合性種のタバコ(Nicotiana tabacum)に導入して、heterologous plantでの発現の場所がトマトの場合と似ているか否かを解析した。得られた形質転換タバコにおいて導入された遺伝子は、トマトの場合と同様、花柱組織で高発現していた。

(1)Objective: To understand the mechanism of genetic incompatibility in wild species,(a) the use of cDNA related to the origin of S gene, the production of S RNase in heterogeneous hosts, and (b) the development and function of S gene including S locus. (2)Research results a-1. Escherichia coli host and application of the situation, the development of fusion protein and intracellular success a-2.Saccharomyces cerevisiae a-3. Insect cell Sf9 is a host cell, RNAP-1 is a protein, and its molecular weight is a protein. b-1. The S gene contains 20kbp in the middle of the protein and is not related to S RNase. The S gene is not related to S RNase and is not related to S RNase. Northern analysis results show that the S gene contains 20kbp in the middle of the protein. S RNase gene fragment from 12kbp upstream style tissue-specific development to about 2 kbp DNA fragment. This domain contains 3kbp genomic DNA sequences, EMBL data base, genomic DNA sequences, and identity products. b-2. Genomic DNA of S_ RNase from the origin of S_<11>RNase is introduced into the heterogenous plant (Nicotiana tabacum), and the site of emergence of heterogenous plant is analyzed. In addition to the above, the structure of the flower is highly developed.