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新しい実験的HIV感染in vitroおよびin vivoモデルの作製

建立新的实验性 HIV 感染体外和体内模型

基本信息

批准号：
02235217
负责人：
宮坂昌之
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02235217/
关键词：
HIV エイズウサギ遺伝子導入 CD4

项目摘要

エイズにおいては、霊長類以外では満足な動物モデルが得られていなのが実情である。しかし、最近、ウサギがHIV,HTLVー1をはじめとするヒトに対するレトロウイルスに感受性を示し、感染効率はあまり高くないものの個体レベルでの実験的感染が可能であることを示唆するデ-タが報告されている。われわれは、ウサギ細胞にHIVのレセプタ-であるヒトCD4を遺伝子導入により発現させることにより、効率のよい実験的感染モデルの作製が可能であるかにつき検討した。まず、HTLVー1感染ウサギT細胞株をホストとしてヒトCD4遺伝子導入を試みた。ヒトCD4をコ-ドするcDNAをBCMGSNeo発現ベクタ-に挿入し、電気穿孔法を用いてトランスフェクションを行った。得られたG418耐性株についてヒトCD4の発現をフロ-サイトメトリ-法により検討した。得られた株はいずれもきわめて高いヒトCD4の発現がみられた。このうち、2株を選びHTLV IIIbを加えHIV特異抗原の発現がみられるかにつき蛍光抗体法を用いた検討した。その結果、きわめて弱いHIVの感染しか認められなかった。しかし、これらの株を、予めHIVを感染させておいたヒトT細胞株MOLT4と共培養すると著しい巨細胞形成が認められ、さらに細胞内、外に多数のHIVの形態をもったウイルス粒子が電顕的に観察された。培養上清中には高いp24活性が認められたことから、ヒトCD4を発現するウサギT細胞においてHIVの感染、増殖がおきていることが確認された。これらのことは、ヒトCD4遺伝子の導入によりウサギ細胞にHIV感受性が付与されたことを示す。現在、ウサギ個体へのヒトCD4遺伝子の導入を試みているが、遺伝子導入には成功しているものの、導入遺伝子の発現がみられていない。

In addition to the long and short categories, there are also animals that can be found in real life. HIV,HTLV-1, HIV-1, HIV-1, HIV-1 It is possible to prevent HIV infection by introducing CD4 gene into cells, and to prevent HIV infection by preventing HIV infection. HTLV-1 infected T cell lines were tested for CD4 gene transfer. CD4 cDNA was found in BCMGSNeo and was used in electroporation. G418 resistant strain was found to be resistant to CD4. In order to achieve this goal, we should pay close attention to the development of CD4. The detection of HIV-specific antigen was investigated by using the light antibody method. HIV infection is the result of HIV infection. HIV infection in T cell lines MOLT4 and co-culture in vitro and in vivo High p24 activity in culture supernatants was identified as a cause of HIV infection and proliferation in T cells. The introduction of the CD4 gene into the cells indicates that HIV is susceptible. Now, it is necessary to introduce the CD4 gene from the individual, introduce the gene successfully, and introduce the gene into the cell.