ヒト・アクチン遺伝子の転写調節に関与する核蛋白質の精製とクロ-ニング

人肌动蛋白基因转录调控相关核蛋白的纯化和克隆

• 批准号: 02258211
• 负责人: 三輪 岳志
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02258211/
• 关键词: 転写因子; 遺伝子発現; 筋肉; アクチン; ヒト遺伝子; 遺伝子進化

6種類のヒトアクチン遺伝子のうち唯一DNA構造が決定されていなかった胃壁平滑筋アクチン遺伝子のcDNAとゲノム遺伝子のクロ-ニングを行なった。その結果、ヒトアクチン遺伝子群の進化過程の仮説が考えられ、その過程は発現組織の発生進化とよく一致した。マウスの培養筋原細胞のC2細胞はinvitroの筋形成過程で他の筋肉系蛋白質と同様に4種類の筋肉系アクチンの発現量が増大する。この細胞を用いて血管平滑筋アクチン・胃壁平滑アクチン遺伝子の発現調節に関与する領域を調べたところ、プロモ-タ-領域及び第一イントロン内に発現制御部位があり、そこにはCArG配列が含まれ、細胞の核抽出液中にCArG配列に結合する蛋白質(CBF)がみいだされる。CArG配列の合成オリゴマ-DNAによる人工変異配列を用いた結果では、このCBFの結合能とCATassayによる発現レベルがよく一致した。C2細胞からcDNAライブラリ-を作成し、CArG配列の合成オリゴマ-をプロ-ブとして結合する蛋白質のcDNA(CBFーA)をクロ-ニングした。しかし。CBFーAをC2細胞で大量に発現させると、CArG配列をプロモ-タ-にもつ遺伝子の発現を低下させ、リプレッサ-として働いた。また、CBFーAはinvitroで各々のCArG配列に結合するが、一本鎖DNAにも強く結合し、C2細胞で見出されるCBFとは性質を異にした。したがった、CBFーAは新奇のCArG配列結合蛋白質であろう。

6. This is the only DNA system that determines whether the smooth tendons in the stomach wall are smooth or smooth. The cDNA are very sensitive. The results of the experiment, the progress of the sub-group, the process of learning, and the results of the process show that organizational students are consistent in the process. In the process of the formation of invitro tendons in the original cell C2, the amount of protein in the muscle system is the same as that in the same group. The blood vessel smooth tendons were used to smooth the wall of the stomach and the stomach wall was smoothed. The cells were divided into two groups: the blood vessel, the smooth muscle, the smooth muscle of the stomach, the The combination of synthetic CBF and DNA CBF in CArG can show that the results are consistent with each other. C2 cells were divided into two groups, and the CArG was arranged to combine the protein cDNA (cDNA) with the synthetic protein (CBF). Thank you. CBF

项目成果

Miwa,T et al.,: "Structure,chromosome location and expression of the human smooth muscle(enteric type)γーactin gene:Evolution of six human actin genes." Molecular Cellular Biology. (1991)

Miwa,T 等人，“人类平滑肌（肠型）γ-肌动蛋白基因的结构、染色体位置和表达：六个人类肌动蛋白基因的进化”（1991 年）。

Miwa,T.and Kamada,S.: "The uncleotide sequence of a human smooth muscle(enteric type)γーactin cDNA." Nucleic Acids Res.,. 18. 4263 (1990)

Miwa, T. 和 Kamada, S.：“人平滑肌（肠型）γ-肌动蛋白 cDNA 的叔核苷酸序列。核酸研究 18. 4263 (1990)

Nakano,Y et al.,: "Transcriptional regulatory elements in the 5'upstream and first intron regions of the human smooth muscle(aortic type)αーactinーencoding gene." Gene. (1991)

Nakano, Y 等人：“人类平滑肌（主动脉型）α-肌动蛋白编码基因 5 上游和第一内含子区域的转录调控元件。”