血管平滑筋のアクチン遺伝子発現機構と遊走増殖

血管平滑肌肌动蛋白基因表达机制及迁移增殖

• 批准号: 04263226
• 负责人: 三輪 岳志
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04263226/
• 关键词: アクチン遺伝子; 平滑筋; 遺伝子発現; 転写因子

血管平滑筋アクチンの発現調領域の解析からプロモーター部位と第一イントロン内部に発現調筋領域を見いだし、この領域に核内因子の結合するDNAエレメントとして3種類の同定した。第1のCArGbox配列(10塩基のCC(A-Trich)_6GG)はアクチン遺伝子群に共通に繰り返し見いだされており、第1イントロンのCArGbox配列が核内因子への強い結合能と転写促進機能を示した。第2はTAATをモチーフにするA/T領域で、非筋肉細胞での発現に関与しているらしい。第3はEbox配列(6塩基のCANNTG)を認識するMyoD1ファミリー遺伝子関連の転写調節系である。この研究ではCArGbox配列に結合する因子のクローニングを行なった。マウスC2筋肉細胞ではin vitroの分化誘導で両平滑筋アクチン遺伝子の発現が一過的に上昇するが、この細胞からcDANライデラリーを作成し、フィルター上の大腸菌で発現させ、血管平滑筋アクチン遺伝子の第一イントロンのCArGbox配列に結合するcDNA得た。このクローンは全長1.6Kbで285アミノ酸(30.8KDa)をコードし、ヒト、マウス、ニワトリで一コピー遺伝子として保存されており、生物的に重要な働きをすると考えられた。大腸菌で作成したこの蛋白質は各種CArGbox配列に特異的であるが弱くしか結合せず、むしろ一本鎖DNAに非特異的に強く結合した。C2細胞で強制発現させると、CArGbox配列の正の転写調節を阻害するように働き。転写のレプレッサーとしての活性を持つことが明らかになった。また、この遺伝子はマウスの各種臓器で発現しているが、骨格筋での発現量が少なくCArGbox配列の組織特異的発現を抑える負の調節を行なう転写調節因である可能性が高い。

Analysis of the regulatory domain of vascular smooth muscle cells: identification of three types of DNA regulatory domains: the first type of DNA regulatory domain, the second type of DNA regulatory domain, and the third type of DNA regulatory domain. The first CArGbox arrangement (CC(A-Trich)_6GG) is a common feature of the 10th base CC(A-Trich)_6GG, and the first CArGbox arrangement is a strong binding energy and writing promotion function of the nuclear factor. The second is the A/T domain of TAAT and the development of non-muscle cells. The third Ebox arrangement (6-base CANNTG) is recognized by MyoD1, which is a genetic modification system. This study is based on the CArGbox configuration and combination of factors. C2 muscle cells were induced to differentiate in vitro, and the expression of smooth muscle cells was increased. The cDNA was synthesized by DNA sequencing, E. coli expression, and the first expression of smooth muscle cells in C2 muscle cells. The total length of this protein is 1.6Kb and 285 kD. The acid (30.8KDa) is mainly used for the preservation of the protein. E. coli makes proteins that bind weakly to a variety of CArGbox alignments and strongly to a single DNA sequence that is not specific. C2 cells are stressed and the positive transcription regulation of CArGbox is blocked. The activity of writing and writing is very important. There is a high possibility that the occurrence of various organs in the body and the amount of tissue specific occurrence in the bone and tendon of the CArGbox arrangement will be reduced.

项目成果

鎌田 真司: "A protein binding to CArG box motifs and single-stranded DNA rumctions as a transcriptional repressor" Gene. 119. 229-236 (1992)

Shinji Kamata：“一种与 CArG 盒基序和单链 DNA 反应结合的蛋白质，作为转录抑制因子”Gene。 119. 229-236 (1992)