セルラ-ゼの相乗効果を利用した直接〓酵菌の育種

利用纤维素酶协同效应直接发酵育种

• 批准号: 03203249
• 负责人: 荒井 基夫
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Osaka Prefecture University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03203249/
• 关键词: セルラ-ゼ; 遺伝子発現; アスペルギラス

本研究はトリコデルマのセルラ-ゼと強い相乗効果を示すアスペルギラスクレア-タスを分離し、酵素アクセラ-ゼを得たことを出発点としている。これらの酵素を混合使用すると、草本植物繊維が完全糖化できた。この混合酵素からいくつかのセルロ-ス分解に必要な新しい酵素を発見した。本研究はこれらの酵素の遺伝子のクロ-ニングを行い、これらの遺伝子を酵母に導入して、セルロ-スよりエタノ-ルを生成する酵母の育種を計ることを目的として計画された。アスペルギラスFI CMCaseの大腸菌及び酵母菌体内での発現については昨年度に報告した。そこで、生産性の向上さらに最終的なセルロ-ス発酵性酵母の造成へのアプロ-チとして、FIーCMCaseの分泌生産について検討した。分泌シグナルとしてFIーCMCase自身のシグナル配列を用いた。酵母由来のGAPプロモ-タの下流にシグナル配列を介してFIーCMCase遺伝子を連結したプラスミドをサッカロミセスに導入したところ菌体外にセルラ-ゼ活性が認められた。形質転換体では精製標品と同じ分子量の2万4千の蛋白、さらに分子量2万八千の蛋白が観察され、両蛋白ともにセルラ-ゼ活性を有していた。分子量2万8千の蛋白は糖鎖の付加と考えられた。種々の異なる酵母を宿主にしたとき、DC5株が最高であった。CMCase活性の殆どが菌体外に認められ最高約300units/lに達した。以上の結果から、今後FIーCMCase遺伝子とともにβーglucosidase遺伝子を酵母に導入することによってセロオリゴ糖からエタノ-ルを生産させることが可能であると考える。

This study は ト リ コ デ ル マ の セ ル ラ - ゼ と strong い phase 乗 unseen fruit を shown す ア ス ペ ル ギ ラ ス ク レ ア - タ ス を separation し, enzyme ア ク セ ラ - ゼ を have た こ と を と 発 point し て い る. <s:1> れら を enzyme を mixed with すると and herbaceous 繊 vitamin が completely glycated で た た. こ の mixed enzyme か ら い く つ か の セ ル ロ - ス decomposition に な needed new し い enzyme を 発 see し た. This study は こ れ ら の enzyme の heritage 伝 son の ク ロ - ニ ン グ を い, こ れ ら の posthumous son 伝 を yeast に import し て, セ ル ロ - ス よ り エ タ ノ - ル を generated す の る yeast breeding を meter る こ と を purpose と し て project さ れ た. Youdaoplaceholder0 アスペ ギラスFI CMCase で in escherichia coli and び yeast で で present に で て て て て に yesterday 's に report た た. そ こ で, productive の upward さ ら に final な セ ル ロ - ス 発 leaven through sexual yeast の へ の ア プ ロ - チ と し て, FI ー CMCase の secretion production に つ い て beg し 検 た. Secrete シグナ シグナ と <s:1> て てFI シグナ CMCase itself <s:1> シグナ を and を use を た. Yeast origin の GAP プ ロ モ - タ の obscene に シ グ ナ ル go を interface し て FI ー CMCase posthumous son 伝 を link し た プ ラ ス ミ ド を サ ッ カ ロ ミ セ ス に import し た と こ ろ bacteria in vitro に セ ル ラ actiity ゼ が recognize め ら れ た. Form quality planning in body で は refined with standard product と じ の の 24000 molecular weight protein, さ ら に molecular weight protein 2 eight thousand の が 観 examine さ れ, struck protein と も に セ ル ラ actiity ゼ を have し て い た. Molecular weight 28,000 <s:1> protein <s:1> sugar lock <e:1> plus と examination えられた. The 々 isomeric なる yeast を host に に たと たと なる が, DC5 strain が the highest であった. The in vitro に recognition められ of CMCase active nuclear bacteria is up to approximately 300units/lに and up to <s:1> た. の above results か ら, future FI ー CMCase heritage 伝 son と と も に beta ー glucosidase posthumous son 伝 を yeast に import す る こ と に よ っ て セ ロ オ リ ゴ sugar か ら エ タ ノ - ル を production さ せ る こ と が may で あ る と exam え る.

项目成果

南口 和久,川口 剛司,大井 俊彦,新名 惇彦,岡田 弘輔,村尾 澤夫,荒井 基夫: "異種宿主で発現したAspergillus aculeatus由来FIーCMCaseの比較" 日本農芸化学会誌. 66. 499 (1992)

Kazuhisa Minamiguchi、Tsuyoshi Kawaguchi、Toshihiko Oi、Atsuhiko Niina、Hirosuke Okada、Sawao Murao、Motoo Arai：“来自不同宿主中表达的棘孢曲霉的 FI-CMCase 的比较”日本农业化学学会杂志 66. 499（1992 年）。 ）