セルラ-ゼの相乗効果を利用した直接発酵菌の育種

利用纤维素酶协同效应选育直接发酵菌

• 批准号: 02203247
• 负责人: 荒井 基夫
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Osaka Prefecture University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02203247/
• 关键词: セルラ-ゼ; クロ-ニング; CMーセルラ-ゼ; Aspergillus; Trichoderma

本研究はセルロ-ス分解に必要な新しい酵素遺伝子のクロ-ニングを行うとともに、これらの遺伝子を酵母に導入して、セルロ-スよりエタノ-ルを生成する酵母の育種を計ることを目的として計画され、本年度は下記の2項目の検討を進めた。(1)FI CMCaseの大腸菌での発現Aspergillus aculeatusの生産するアクセラ-ゼの酵素群の中で膨潤セルロ-ス分解に大きな役割をするFI CMCaseのcDNAクロ-ンの取得をに成功した。ついで、大腸菌で成熟型FI CMCaseを生産させることを目標として、発現ベクタ-を構築した。この構築したプラスミドを大腸菌JM105などの株に導入したところ、大量の酵素生産が認められた。この大腸菌の培養液にグリシンを添加すると、酵素の漏出が起こり、大量の酵素が培地中に蓄積した。この培養液から硫安塩析、DEAEーセファデックスカラムクロマト、トヨパ-ル HW55F疎水クロマトという簡単な操作で収率よく、電気泳動的に均一な精製酵素標品を得た。(2)FI CMCaseの酵母での発現FI CMCase遺伝子の酵母での発現を試みた。イントロンを含まないcDNAを用いて、シグナルペプチドを除いた成熟型のFIーCMCaseを酵母内で発現させるように発現ベクタ-の構築し、酵母S__ー.<cerevisiae>___ーを形質転換したところ、分子量的にも免疫学的にも標品と同一のタンパク質が発現していることが確認された。セルラ-ゼ活性は培養約50時間後に最高となった後、減少した。これは発現したタンパク質が、菌体内のプロテア-ゼにより分解されると考えられる。今後、生産性の検討が必要があると考えられる。翻訳産物の局在を調べたところ、発現した成熟型のFIーCMCaseは菌体内に存在していることが明らかとなった。

In this study, it is necessary to decompose the enzyme and introduce the new enzyme into the yeast.ルロ-スよりエタノ-ルをGeneration Yeast Breeding を Plan ることを Purpose として Plan され, は下记の2 Project の検 Discussion を Advance めた this year. FI CMCase's cDNA クロ-ンの was successfully obtained.ついで, coliform mature type FI CMCase を production させることを target として, 発行ベクタ-をconstruction した. The construction and construction of Escherichia coli JM105 strain is introduced and large-scale enzyme production is carried out. The coliform culture solution is added to the culture medium, the enzyme is leaked out, and a large amount of enzyme is accumulated in the ground.このculture medium から thiamine chloride analysis, DEAE ーセファデックスカラムクロマト, トヨパ-ルHW55F is a water-soluble enzyme that has a simple operation, a high yield, and a homogeneous and refined enzyme standard by electrophoresis. (2) FI CMCase の Yeast で の発 FI CMCase 伝子 の Yeast で の発 Now を TES み た.イントロンをcontaining まないcDNA を いて, シグナルペプチドを いた mature type のFIーCMCaseで発appears inside the yeast, yeast appears S__ー.<cerevisiae>___ーをmorphology changeしたところ、molecular weight The standard of immunology is the same as the standard one. The quality is now confirmed. The activity of セルラ-ゼは reaches the highest level after culturing for about 50 hours and then decreases. The これは発appears したタンパク性が, and the のプロテア-ゼにより decomposition inside the bacteria されると卡えられる. From now on, it will be necessary for productivity to be improved. The result of the translation product is that it exists in the body of the mature type of CMCase and the mature type of CMCase.

项目成果

T.Ooi: "Cloning and sequence analysis of a cDNA for cellulase (FIーCMCase) from <Aspergillus>___ー <aculeatus>___ー," Current Genetics. 18. 217-222 (1990)

T.Ooi：“来自 <曲霉>___<aculeatus>___的纤维素酶 cDNA 的克隆和序列分析，”《当代遗传学》18. 217-222 (1990)。

T.Ooi: "Complete nucleotide sequence of a gene coding for <Aspergillus>___ー <aculeatus>___ー cellulase (FIーCMCase)" Nucleic Acids Researc. 18. 5884 (1990)

T.Ooi：“编码 <曲霉>___<aculeatus>____ 纤维素酶 (FIーCMCase) 的基因的完整核苷酸序列”核酸研究 18. 5884 (1990)。