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セルラ-ゼの相乗効果を利用した直接発酵菌の育種

利用纤维素酶协同效应选育直接发酵菌

基本信息

批准号：
01603539
负责人：
荒井基夫
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Osaka Prefecture University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-01603539/
关键词：
セルラ-ゼクロ-ニング CM-セルラ-ゼ Aspergillus Trichoderma

项目摘要

本研究は市販Trichodermaのセルラ-ゼと強い相乗効果を示す。酵素アクセラ-ゼ生産菌Aspergillus aculeatusを得たことを出発点としている。この混合酵素の相乗効果の機構を解明を行い、これまでにいくつかのセルロ-ス分解に必要な新しい酵素を発見してきた。本研究は真に必要な酵素群を明らかにし、これらの酵素の遺伝子のクロ-ニングを行うとともに、これらの遺伝子を酵母に導入して、セルロ-スよりエタノ-ルを生成する酵母の育種を計ることを目的にして計画された。成果の概要は以下の通りである。(1)膨潤セルロ-スの酵素分解に大きな役割をするFICMCaseの遺伝子のクロ-ニングを行った。A.aculeatusF50の対数増殖期菌体からpoly(A)+RNAを調製し常法によりcDNAを合成した後pUC13に連結し大腸菌を形質転換した。本酵素蛋白の部分一次構造を基に合成したプロ-ブを用いたコロニ-ハイブリダイゼ-ションにより全長cDNAクロ-ンの取得に成功し、その塩基配列を決定した。次に染色体DNAのクロ-ニングを行った。染色体DNAをXbaIで完全に切断し、断片をpUC19に挿入し、大腸菌を形質転換して染色体DNAライブラリ-を作成した。cDNAをプロ-ブとしたコロニ-ハイプリダイゼ-ションにより選択した陽性クロ-ンのDNAの塩基配列解析の結果、FICMCaseは2個のイントロン(94bp,87bp)を有する892bpのDNA上にコ-ドされていた。(2)大腸菌内で成熟型FICMCaseを生産させることを目標として、発現ベクタpHEM41(3.4kbp)を構築した。このプラスミドはtacプロモ-タ-支配下、成熟型FICMCaseをコ-ドする遺伝子に翻訳開始のATGコドンを付加してある。このプラスミドを大腸菌KP3998株に導入したところ、1%CMCを含む寒天プレ-ト上でコンブレット染色にて明瞭なハロを形成した。さらに、酵母での発現も成功した。

This study demonstrated the effects of Trichoderma on the growth and development of human beings. Enzyme production Aspergillus aculeatus The mechanism of these hybrid enzymes and their relative effects is explained in detail, and new enzymes are found necessary for their decomposition. This study aims to establish a breeding program for yeast by introducing essential enzyme groups into yeast cells and by producing enzyme genes. Summary of results: (1)The enzyme decomposition of the swelling enzyme is carried out by FICMC enzyme. A. aculetusF50 was synthesized from poly(A)+RNA during the growth phase of E. coli by cDNA synthesis and DNA sequencing. The sequence of this enzyme is determined by the sequence of the first sequence of cDNA. The secondary chromosome DNA is detected in the chromosome. Chromosome DNA is completely cut off, fragments are inserted into pUC19, Escherichia coli is transformed into chromosome DNA fragments, and DNA fragments are produced. The results of DNA base alignment analysis of cDNA fragments and FICMCase 2 fragments (94bp,87bp) were found in 892bp DNA fragments. (2)The mature FICMCase in E. coli was constructed for the purpose of production and development of pHEM41 (3.4kbp). The mature FICMCase is under the control of TAC and ATG. The introduction of E. coli KP3998 strain into the culture medium with 1% CMC showed that E. coli KP3998 strain was formed in the culture medium with 1% CMC. Today, the yeast has successfully emerged.