微生物のセロビオース及びセロデキストリンフォスフォリラーゼに関する研究

微生物纤维二糖和纤维糊精磷酸化酶的研究

• 批准号: 03660116
• 负责人: 荒井 基夫
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Osaka Prefecture University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 1992
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03660116/
• 关键词: ホスホリラーゼ; 酵素; 微生物; セロビオース; セロデキストリン; クローニング; セロビオ-スフォスフォリラ-ゼ; セロデキストリンフォスフォラリ-ゼ; クロストリジウム; クロ-ニング

近年様々なオリゴ糖に対する関心が高くなってきている、セロオリゴ糖は未開発なオリゴ糖の一つである、C.thermocellumのセロビオースホスホリラーゼ(CBPase)およびセロデキストリンホスホリラーゼ(CDPase)の加リン酸分解の逆反応を利用すると、グルコースとグルコース1リン酸からセロオリゴ糖が合成できるのことが分かった。本研究において、これら酵素の生産性の改良と、構造の検討を目的として両遺伝子のクローニングを計画、実施した。クロストリジウムの菌体内から精製した両酵素をトリプシンで消化し、各ベプチドのアミノ酸配列を決定した。この配列からCBPaseに対するプローブ1種類とCDPaseに対するプローブ2種類を設計した。合成プロープを用いてCBPase遺伝子のクローニングを行なった。ゲノムのザザンプロッティングにより、ハイブリッド形成する制限酵素消化断片をpUC18に挿入し、大腸菌DH5αを形質転換した。ゲノムライブラリーをコロニーハイブリダイゼーションによって検索した結果、Hid III断片が挿入された12個のコロニーを得た。しかし、このプラスミド断片内に一般的な制限酵素サイトは存在しなかった。同様な手法でDCPase遺伝子のクローニングを行った。Hind III消化断片(1.5Kb付近)から得たゲノムライブラリーからコロニーハイブリダイゼーションによる検索を行い、24個のコロニーを得た。これらが保持しているプラスミドの制限酵素地図から、すべてに同じDNA断片(1.5kb)が挿入されていることが分かった。現在この断片の塩基配列を決定中である。

In recent years, others 々 な オ リ ゴ sugar に す seaborne る masato high heart が く な っ て き て い る, セ ロ オ リ ゴ sugar は not open 発 な オ リ ゴ sugar の つ で あ る, C.t hermocellum の セ ロ ビ オ ー ス ホ ス ホ リ ラ ー ゼ (CBPase) お よ び セ ロ デ キ ス ト リ ン ホ ス ホ リ ラ ー ゼ (CDPase) の リ ン acid decomposition の rebellious attitude 応 を using す る と, グ ル コ ー ス と グ ル コ ー ス 1 リ ン acid か ら セ ロ オ リ ゴ sugar が synthetic で き る の こ と が points か っ た. This study に お い て, こ れ ら enzyme modified と の productive の, tectonic の beg を 検 purpose と し て struck heritage 伝 son の ク ロ ー ニ ン グ を plan, be し た. ク ロ ス ト リ ジ ウ ム の bacteria in vivo か ら refined し た struck enzyme を ト リ プ シ ン で digestion し, each ベ プ チ ド の ア ミ ノ acid with column を decided し た. こ の match column か ら CBPase に す seaborne る プ ロ ー ブ 1 species と CDPase に す seaborne る プ ロ ー ブ 2 kinds を design し た. To synthesize プロ プを プを, use the て てCBPase progeny 伝, <s:1> なった ロ ニ ニ グを グを グを グを グを グを グを なった なった. ゲ ノ ム の ザ ザ ン プ ロ ッ テ ィ ン グ に よ り, ハ イ ブ リ ッ ド form す limitations る enzyme digestion fragment を pUC18 に scions into し, coliform DH5 alpha を form quality planning in し た. ゲ ノ ム ラ イ ブ ラ リ ー を コ ロ ニ ー ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン に よ っ て 検 cable し た results, Hid III fragment が scions into さ れ た 12 の コ ロ ニ ー を た. There are に general な limiting enzymes サ ト ト ト プラス ド ド in the ド fragment, な な った ト ト ト ト な な. The same な technique でDCPase is used to pass the 伝 sub-pass <s:1> ロ <s:1> ニ グを グを グを グを った to った. Hind III digesting fragment (pay nearly 1.5 Kb) か ら have た ゲ ノ ム ラ イ ブ ラ リ ー か ら コ ロ ニ ー ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン に よ る 検 cable line を い, 24 の コ ロ ニ ー を た. こ れ ら が keep し て い る プ ラ ス ミ ド limitations の enzymes to 図 か ら, す べ て に with じ DNA fragment (1.5 KB) が scions into さ れ て い る こ と が points か っ た. Now the を base arrangement of the <s:1> fragment is in the を decision である.

项目成果

K.TANAKA,M.ARAI: "Purification and Characterization of cellodextrinphosphorylase from Clostスidium thermocellum" J.Biochem.

K. TANAKA、M. ARAI：“来自热纤梭菌的纤维糊精磷酸化酶的纯化和表征”J.Biochem。

M.ARAI,K.TANAKA: "Purification and Characterization of cellobiosephosphorylase from Clostridium thermocellum" J.Biochem.

M.ARAI，K.TANAKA：“来自热纤梭菌的纤维二糖磷酸化酶的纯化和表征”J.Biochem。