セルラーゼの相乗効果を利用した直接醗酵菌の育種

利用纤维素酶协同效应选育直接发酵菌

• 批准号: 62603550
• 负责人: 荒井 基夫
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Osaka Prefecture University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62603550/
• 关键词: セルラーゼ; クローニング; CM-セルラーゼ; β-グルコシダーゼ; Aspergillus; Trichoderma

i) アクセラーゼとメイセラーゼの相乗効果, アクセラーゼとメイセラーゼの相乗作用を解明するために, まず, 両酵素剤に含まれる全セルラーゼ成分を均一に分取した. アクセラーゼからは9種の成分を得て, それぞれのセルロース分解に果たす役割を検討した. 結晶セルロース分解には5種の酵素が重要な役割を果たしていることが, 明らかとなった. 一方, メイセラーゼからは14種のセルラーゼ成分を均一に分離した. その中で結晶セルロース分解には4種の酵素が重要であることが明らかとなった.ii) アクセラーゼのF1CM-セルラーゼ遺伝子のクローニング 分子量が小さいF1CM-セルラーゼのクローニングを行った. 本酵素をBrCN処理して得られたペプチドの, 部分アミノ酸配列を決定した. これらの結果を用い塩基プローブを合成した. ついで, Asp, aculeatus, No.F-50の菌体からmRNAを抽出し, これを鋳型として二本鎖cDNAを合成し, プラスミドpUC19に連結した. ついで, 合成した塩基をプローブとして, コロニーハイブリダイゼーションにより検索したところ, ポジティブクローンを得ることができた.iii) アクセラーゼのβ-グルコシダーゼ遺伝子のクローニング 重合度の高い不溶性セロオリゴ糖からさえも効率よくグルコースを放出するβ-グルコシダーゼ遺伝子のクローニングを試みた. 菌体DNAを制限酵素で分解し2K-10KbpのDNAをプラスミドYEp13に連結し大腸菌に入れ, gene bankを作成した. これをSaecharomyces cerevisiae NA87-11Aに導入しセロビオースを唯一の炭素源としたプレート上で生育する酵母を1株得ることができた.

I) ア ク セ ラ ー ゼ と メ イ セ ラ ー ゼ の phase 乗 unseen fruit, ア ク セ ラ ー ゼ と メ イ セ ラ ー ゼ の phase 乗 role を interpret す る た め に, ま ず, struck enzyme に contain ま れ る full セ ル ラ ー ゼ composition を uniform に divide し た. ア ク セ ラ ー ゼ か ら は nine の composition を て, Youdaoplaceholder0 セ セ ロ ロ それぞれ ス ス to decompose に fruit たす to cut を検 to collect た. Crystallization セ ル ロ ー ス decomposition に は five の important な "を cut fruit enzyme が た し て い る こ と が, Ming ら か と な っ た. One party メ イ セ ラ ー ゼ か ら は 14 の セ ル ラ ー ゼ composition を uniform に separation し た. そ の で crystals in セ ル ロ ー ス decomposition に は four important で の enzyme が あ る こ と が Ming ら か と な っ た. Ii) ア ク セ ラ ー ゼ の F1CM - セ ル ラ ー ゼ heritage 伝 son の ク ロ ー ニ ン グ Small molecular weight が さ い F1CM - セ ル ラ ー ゼ の ク ロ ー ニ ン グ を line っ た. This enzyme を BrCN 処 Richard し て have ら れ た ペ プ チ ド の, part ア ミ ノ acid with column を decided し た. こ れ ら の results を い salt base プ ロ ー ブ を synthetic し た. つ い で, Asp, aculeatus, No. 50 の F - bacteria か ら mRNA し を spare, Type こ れ を where と し て 2 lock cDNA synthesis し を, プ ラ ス ミ ド pUC19 に link し た. つ い で, synthetic し た salt base を プ ロ ー ブ と し て, コ ロ ニ ー ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン に よ り 検 cable し た と こ ろ, ポ ジ テ ィ ブ ク ロ ー ン を have る こ と が で き た. Iii) ア ク セ ラ ー ゼ の beta グ ル コ シ ダ ー ゼ posthumous son 伝 の ク ロ ー ニ ン グ coincidence degree high の い insoluble セ ロ オ リ ゴ sugar か ら さ え も sharper rate よ く グ ル コ ー ス を release す る beta グ ル コ シ ダ ー ゼ heritage 伝 son の ク ロ ー ニ ン グ を try み た. Bacterial DNAを restriction enzyme で decomposes <s:1> 2K-10Kbp DNAをプラス ドYEp13に links escherichia coli に into れ Gene bank を made し た. こ れ を Saecharomyces cerevisiae NA87-11 - a に import し セ ロ ビ オ ー ス を の only carbon source と し た プ レ ー ト on family で す る を 1 yeast strains have る こ と が で き た.