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セルラーゼの相乗効果を利用した直接醗酵菌の育種

利用纤维素酶协同效应选育直接发酵菌

基本信息

批准号：
63603545
负责人：
荒井基夫
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Osaka Prefecture University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63603545/
关键词：
セルラーゼクローニング CM-セルラーゼ Aspergillus Trichoderma

项目摘要

本研究はTrichodermaのセルラーゼとAspergillus aculeatusのセルラーゼ(アクセラーゼ)を混合使用すると強い相乗効果が現れることを出発点とし、両酵素剤による相乗効果について考察を加え、真に必要な酵素群を明らかにすること、ついで、これらの酵素の遺伝子のクローニングを行うとともに、これらの遺伝子を酵母に導入して、セルロースよりエタノールを生成する酵母の育種を計ることを目的として計画された。本年度の研究は下記の項目について検討した。(I)アクセラーゼとメイセラーゼの相乗作用を解明するために、まず、両酵素剤に含まれる全セルラーゼ成分を均一に分取した。それぞれの酵素のセルロース分解に果す役割を検討した。その結果、幾つかのセルロース分解に重要な酵素成分明らかにした。(II)セルラーゼ遺伝子のクローニングを行うにあたり、まず、膨潤セルロースの酵素分解に大きな役割をするFI CMセルラーゼを選んだ。本酵素の部分一次構造解析の結果を用い塩基プローブを合成し、これを用いcDNAバンクからコロニーハイブリダイゼーションにより、陽性クローンを得た。このものの塩基配列はBrCNペプチドのアミノ酸配列と完全に一致した。しかし、このcDNA断片は全長の構造遺伝子を含んでおらず、全長cDNAクローンの取得を行っている。上記で得たcDNAの断片を用い染色体DNAのフローリングを行った。その結果、cDNAをプローブとしたコロニーハイブリダイゼーションにより数個の陽性クローンが得られた。この塩基配列を決定した結果、94bpのイントロンを持つ769bpからなる構造遺伝子を含んでいると考えられた。構造遺伝子は223アミノ酸をコードしており、Metから始まる16アミノ酸からなるシグナルペプチドを持つと推定された。これは本酵素の分子量、アミノ酸組成と良く一致しており、決定した部分アミノ酸配列と完全に一致した。現在、この遺伝子の酵母に導入、発現を計画している。

This study is based on Trichoderma's Aspergillus aculeatusのセルラーゼ(アクセラーゼ)をMixed useするとstrongいmultiplying effectがNowれることを出発点とし、両Enzyme 剤による Mutual Effect について Observation をAdd え、True Necessary な Enzyme Group を明らかにするYeast Import して, セルロースよりエタノールを generate するyeast のbreeding を plan ることをpurpose として plan された. This year's research projects are listed below. (I)アクセラーゼとメイセラーゼの multiplying effect を解明するために, まず, 両Enzyme 䉤に contains まれるall ingredients of セルラーゼを evenly divided into した. The enzyme is used to decompose the fruit and cut it.そのRESULTS, つかのセルロースbreakdown にimportant enzyme ingredient らかにした. (II) セルラーゼ伝子のクローニングを行うにあたり、まず、Swelling セルロースのEnzyme decomposition に大きな个 Cut をするFI CMセルラーゼを选んだ. The results of the partial primary structure analysis of this enzyme were synthesized using い塩-based プローブを, and これを was used as cD NAバンクからコロニーハイブリダイゼーションにより, positiveクローンを得た. The このものの塩base arrangement is BrCNペプチドのアミノacid arrangement and it is completely consistent.しかし, このcDNA fragment は full-length の structural remains 伝子をんでおらず, full-length cDNA クローンの Obtain を行っている. The cDNA fragments mentioned above were obtained using the chromosomal DNA fragments.そのRESULTS、cDNAをプローブとしたコロニーハイブリダイゼーションにより Several のpositive クローンが got られた. The result of この塩array をdetermination, 94bp のイントロンをhold 769bp からなるstructural legacy 伝子を有んでいるとtest えられた. Structural legacy 伝子は223アミノ acid をコードしており、Metからstart まる16アミノ acid からなるシグナルペプチドをhold つとESTIMATE された. The molecular weight of this enzyme and the composition of the amine acid are consistent and consistent, and the partial amine acid composition is determined to be completely consistent. Now, the introduction of yeast of この伝子のに, the plan of 発成をしている.