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細胞のエンドサイト-シスを利用した膜融合を用いるドラッグデリバリ-

利用细胞内吞作用通过膜融合进行药物递送

基本信息

批准号：
03205066
负责人：
大西俊一
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

インフルエンザウイルスの膜融合活性タンパク質(HAタンパク質)の活性部位を模した酸性pHー依存的膜融合活性ペプチド(HAペプチド)及び、そのアナログペプチド数種を合成し、タンパク質・核酸・薬剤等を封入したリポソ-ム表面に吸着・共有結合させた擬似インフルエンザウイルス(以下人工ウイルス)を調製すれば、細胞のエンドサイト-シスを利用したエンドソ-ム経由の全く新しい細胞内物質導入法の開発ができる。本年度は、人工ウイルスのkey pointとなる弱酸性pH(<6.0)での膜融合活性及び、赤血球溶活性などのbiomembraneに対する活性を有する酸性ペプチド(E5,E5L)を合成し、蛍光法・電顕観察を中心とした物理化学的手法により、融合活性に必要不可欠なペプチドの機能モチ-フを研究した。その結果、HAペプチドのN末端10残基程が活性発現に必要な両親媒性ヘリカル構造をつくる為の「核」となっていることを明らかにした。また、培養細胞に取り込まれた人工ウイルスの挙動をリアルタイムに近い時間スケ-ルでモニタ-することは、今後の人工ウイルス改良に必要不可欠である。本年度は、リポソ-ムを蛍光共鳴エネルギ-移動(RET)を起こす2種の蛍光性脂質(エネルギ-供与体;NBDーPE,エネルギ-受容体;R_<18>)でラベルし、COSー1細胞に非特異的にエンドサイト-シスさせ、高感度ビデオ付き蛍光顕微鏡などで追跡することができた。また、リポソ-ムがエンドソ-ムやリソソ-ムで破壊されたり、それらの膜と融合すると、蛍光性脂質がそれらエンドソ-ムの膜上で拡散、RETが解消し、エネルギ-供与体(NBDーPE)の蛍光強度が増加し蛍光寿命が長くなることを、時間分解顕微蛍光法やセルソ-タを駆使し、単一細胞内での挙動を定量的に測光、追跡できた。

The active site of the インフルエンザウイルスのmembrane fusion active substance (HAタンパク性) is a membrane that depends on acidic pH. Fusion active HA ペプチド (HA ペプチド) and び, そのアナログペプチド several kinds of を synthetic し, タンパクDNA, nucleic acid, etc. Sealed したリポソ-ムsurface にsorption・shared combination させたsimilar インフルエンザウイルス(hereinafter artificial ウイルス)をmodulationすれば、Cell のエンドサイト-シスを Utilizes したエンドソ-ム経于の全く新しい开発ができる using the new intracellular substance introduction method. This year's key pointとなるweakly acidic pH(<6.0)でのmembrane fusion activity and び、erythrolytic activityなどのbiomembraneに対するactive を有するacidic ペプチド(E5, E5L) Synthesis, photometry and electrochemical observation, physical and chemical techniques, fusion activity and functional functions. As a result, the N-terminal 10 residues of HA are necessary for the expression of activity. The structure of the sex ヘリカルをつくる is the "core" となっていることを明らかにした.また、Cultured cells り込まれたArtificial ウイルスの挙动をリアルタイムにNearly timeスケ-ルでモニタ-することは、In the future, artificial ウイルス improvements are necessary and cannot be owed to である. This year, は, リポソ-ムを蛍光 resonance エネルギ-mobile (RET) をこす 2 kinds of の蛍photolipid (エネルギ-donor; NBDーPE, エネルギ-acceptor; R_<18>) でラベルし, COSー1 cell non-specific にエンドサイト-シスさせ, high-sensitivity ビデオFUき蛍光桕microscope tracer することができた.また、リポソ-ムがエンドソ-ムやリソソ-ムで波壊されたり、それらの片とfusionすると, がそれらエンドソ-ムの片上で拡san, RETが解肖し, エネルギ- The donor body (NBDーPE) has an increased light intensity, a longer light life, and a time-decomposed The microphotometric method is used to measure and trace the movement of cells within a single cell.