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フェライト超微粒子を用いた細胞特異的な新機能材料の作製と細胞の膜動輸送の研究

利用超细铁氧体颗粒制备新型细胞特异性功能材料及细胞膜传输研究

基本信息

批准号：
63604552
负责人：
大西俊一
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

強磁性体フェライト超微粒子に生物学的生理活性物質を結合させ、それを種々の特異的生理活性物質の制御投与に利用する目的で、その基礎固めとして、エンドサイトーシスにおける膜動輸送の分子機構を高磁場勾配分離によって研究した。1)径約5nmのフェライトの表面をオレイン酸、さらにリン脂質とアシアロ糖脂質によってコートし、磁気化リガンドを調製した。このリガンドは、長時間安定に分散し、灌流法によってラット肝細胞に導入することが出来た。また組織化学的なマーカーとして、リン脂質と結合させたペルオキシダーゼ等の酵素も結合させることができ、それを組織におけるリガンドの検出に用いた。リガンドは肝実質細胞に到達したが、一部は非実細胞にも取り込まれた。2)ガラスカラムにメッシュ状に加工した磁性ステンレス細線を充填し、それを電磁石中に設置し高磁場勾配分離装置として用いた。まず、磁化リガンドのみの分離を行い、十分な高磁場下(1.8T)で高い分離を非常に早い流速で行うことができることを明らかにした。ついで、リガンドを取り込んだ肝臓のホモジネートをこの分離カラムに通し、リガンドを取り込んだエンドソームをカラム内に捕捉した。カラムを洗浄後、磁場をOFFにし、エンドソームを回収した。この様なカラムを用いることによって、作業時間の短縮、実験操作の簡単化に成功し、不安定な膜構造体であるエンドソームの分離に多くの利点を発揮した。3)本方法によって調製したエンドソームを分析しリガンドの細胞内輸送の途上で、小胞密度が変化し、それと共にリガンドと受容体を含むエンドソームからリガンドを含み受容体を欠くエンドソームへと構造変化を起こすことを明らかにし、これらに特徴的なタンパク脂質を同定することに成功した。

Ferromagnetic ultra-fine particles are used for the study of the binding and separation of biologically active substances, the preparation and utilization of specific physiologically active substances, and the molecular mechanism for membrane transport in high magnetic fields. 1)The surface of the film with a diameter of about 5 nm is modulated by acid, lipid and sugar. The liver cells were introduced into the liver by perfusion method after stable dispersion for a long time Histochemistry, lipid binding, enzyme binding, tissue binding, enzyme binding The liver cells are in the right place, and the liver cells are in the wrong place. 2) Magnetic stenslets are processed in the shape of a cylinder and filled with thin wires, and a high magnetic field coupling and separation device is installed in the electromagnet for use. In the magnetic field (1.8T), the magnetic field is very high, the separation is very high, and the flow rate is very high. In the middle of the game, the player can choose to play the game and play the game. After washing, the magnetic field is OFF, and the magnetic field is returned. The advantages of the separation of unstable membrane structures are realized by reducing the operation time, simplifying the operation, and improving the stability of membrane structures. 3) This method successfully analyzes the intracellular transport of the protein, cell density, and receptor, and determines the structural characteristics of the protein.