トランスジェニックマウスの遺伝的モニタリングシステムの確立

转基因小鼠遗传监测体系的建立

• 批准号: 03206207
• 负责人: 加藤 秀樹
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Central Institute for Experimental Animals
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03206207/
• 关键词: トランスジェニックマウス; 交配; in situ hybridization; 標識遺伝子; 染色体; 生化学的標識遺伝子; マイクロサテライト; PCR

トランスジェニックマウスにおける導入遺伝子DNAの染色体の位置を確認する方法としては,従来法としての交配による方法と直接法とてのin situ hybridization法がある。本年度は,それぞれの方法について開発と改良を行った。交配による方法の場合,導入遺伝子DNAの染色体上の位置の決定は標識遺伝子の数に大きく依存する。これまでは,生化学的標識遺伝子などが中心であったが,最近になって染色体上に多くの標識遺伝子を設ける方法としてマイクロサテライトDNAをPCR法で検出する方法が採られるようになっている。我々は,従来標識遺伝子を持たなかった染色体を中心に補充する形でマイクロサテライトDNAを選んだ結果,全染色体に何らかの標識遺伝子を設けることができた。トランスジェニックマウスのようにすでにDNAが採られている場合,in situ hybridizationは導入遺伝子の位置を明らかにするために有効である。技術の安定を計ることを目的に一箇所に多くのコピ-をもつribosome DNAを対象に実験を行った。我々は第12染色体の動原体部位が第5染色体の動原体部位に転座した染色体異常マウス系統を発見し,転座部位にAgーNORを持つことが見出している。このことをin situ hybridizationで確認した。DNA probeは28S ribosome DNAを用い,nick translationによりビオチン化dUTPでDNAプロ-ブを標識し,FITC標識アビジンンと反応させて蛍光顕微鏡で観察した。その結果,AgーNORが観察された染色体断片に蛍光シグナルを観察した。我々の研究所ではヒトポリオウイルスリセプタ-DNAのトランスジェニックマウスの4系統を導入し,現在実験動物化を進めている。導入された4系統におけるPVR遺伝子DNAの染色体上の位置を上記の2種類の方法で確認する予定である。

The method for confirming the chromosome position of the introduced DNA is the direct method and the in situ hybridization method. This year, we have developed and improved our methods. In the case of mating methods, the location of the introduced DNA on chromosomes is determined by the number of marker genes. The method of designing multiple marker genes on chromosomes by PCR is used to detect biochemical marker genes. We are looking forward to identifying the genetic component of the chromosome. We are looking forward to identifying the genetic component of the chromosome. We are looking forward to identifying the genetic component of the chromosome. When DNA is extracted, the site hybridization is performed. The technology is stable, and the goal is to achieve the goal. Chromosome abnormality was found in chromosome 12 and chromosome 5, and Ag NOR was found in chromosome 5. This is the first time that we've seen this in situ hybridization. DNA probe 28S ribosome DNA,nick translation, DNA labeling,FITC labeling, reverse transcription, optical microscopy As a result,Ag NOR was detected in the chromosome fragments. Our research institute has introduced the four systems of DNA, and now it is becoming more and more animalized. The location of the PVR gene on the chromosome of the introduced 4 systems was determined by the method described above.