機能の創生を目指すオリゴヌクレオチドの化学合成

旨在创造功能的寡核苷酸的化学合成

• 批准号: 03242101
• 负责人: 大塚 栄子
• 金额: $ 8.83万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03242101/
• 关键词: RNA化学合成; リボザイム; 核酸高次構造

1.RNAの配列と特異的切断RNAの配列特異的切断法の一つとしてRNaseHを用いる場合、ハイブリダイズさせるDNA相補鎖を4塩基とし、両端に2'ーOーメチルヌクレオチドを結合させることによって切断を限定できるが、高次構造を持つtRNAに対しては長鎖相補鎖をハイブリダイズさせることによって、効率よく反応が進行することを見出した。これを用いてtRNAの組み換えを行い、蛍光プロ-ブの導入を行った。リボザイムを用いる配列特異的切断の構造活性相関を調べるために、安定なル-プを持つハンマ-ヘッド型リボザイムを設計し、活性を調べたところ、従来のものに比べて活性が上昇することがわかった。2.バクテリオファ-ジT4RNAの自己切断部位に対応するRNAのミニル-プを化学合成し、切断部位を同定した。3.ハンマ-ヘッド型リボザイムのNMRによる構造解析ハンマ-ヘッド型リボザイムのステム部分を化学合成し、NMRによってイミノプロトンを解析することにより水素結合を証明した。必須配列中の二つのグアノシンをイノシンに置換することにより、2位のアミノ基が活性に必要なことを見出した。4.ハンマ-ヘッド型リボザイムの結晶化ハンマ-ヘッド型リボザイムのル-プ部分の三次元構造を知るためには、X線解析による構造解析が必要であるので今年度は結晶化を試み、微少結晶を得た。

1. RNA arrangement specific cutting method RNA arrangement specific cutting method used in RNaseHるoccasion, ハイブリダイズさせるDNA phase complementary lock を4塩基とし,両ENDに2'ーOーメチルヌクレオチドをcombination させることによってcut をlimited できるが, high-order structure をhold つtRNA に対してはThe long-term lock-up lock をハイブリダイズさせることによって, the efficiency よく よく 応が progress することを见出した.これを uses いてtRNAのgroupみ to replace えを行い, and 荍光プロ-ブの imports を行った.リボザイムを Use いる arrangement to specifically cut the structural activity related を べるために, stabilize the なル-プをhold つハンマ-ヘッドtype リボザイムをdesignし, active をtone べたところ, 従来のものに比べてactive がrise することがわかった. 2. The self-cutting part of T4RNA is chemically synthesized and the cutting part is determined. 3. Structural analysis of ハンマ-ヘッド type リボザイムのNMR instrument Partial chemical synthesis, NMR analysis, and hydrogen binding proof. The middle の二つのグアノシンをイノシンにsubstitution することにより and the 2nd digit のアミノbase active にessential なことを见出した. 4. The three-dimensional structure of the crystallized ハンマ-ヘッド type リボザイムの crystallized ハンマ-ヘッド type リボザイムのル-プ part It is necessary to know the structural analysis of X-ray and structural analysis. This year, the crystallization test was carried out, and a small amount of crystallization was obtained.

项目成果

H.Hosaka: "Cleavage Reaction of a Synthetic Oligoribonucleotide Corresponding to the Autocleavage Site of a Precursor RNA from Bacteriophase T4." FEBS Letters. 293. 204-206 (1991)

H.Hosaka：“与来自细菌相 T4 的前体 RNA 自裂解位点相对应的合成寡糖核苷酸的裂解反应。”

A.Murakami: "Fluorescein-Labeled Oligonucleotide Probe:Detection of Hybrid Formation in Solution by Fluorescence Polarization Spectroscopy." Nucleic Acids Research. 19. 4097-4102 (1991)

A.Murakami：“荧光素标记的寡核苷酸探针：通过荧光偏振光谱检测溶液中的杂交形成。”

Makoto Koizumi: "Effects of Phosphorothioate and 2-Amino Groups in Hammerhead Ribozymes on Cleavage Rates and Mg^<2+> Binding" Biochemistry. 30. 5145-5150 (1991)

Makoto Koizumi：“锤头核酶中硫代磷酸酯和 2-氨基对裂解率和 Mg^<2 > 结合的影响”生物化学。