機能の創生を目指すオリゴヌクレオチドの化学合成

旨在创造功能的寡核苷酸的化学合成

• 批准号: 03242101
• 负责人: 大塚 栄子
• 金额: $ 8.83万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03242101/
• 关键词: RNA化学合成; リボザイム; 核酸高次構造

1.RNAの配列と特異的切断RNAの配列特異的切断法の一つとしてRNaseHを用いる場合、ハイブリダイズさせるDNA相補鎖を4塩基とし、両端に2'ーOーメチルヌクレオチドを結合させることによって切断を限定できるが、高次構造を持つtRNAに対しては長鎖相補鎖をハイブリダイズさせることによって、効率よく反応が進行することを見出した。これを用いてtRNAの組み換えを行い、蛍光プロ-ブの導入を行った。リボザイムを用いる配列特異的切断の構造活性相関を調べるために、安定なル-プを持つハンマ-ヘッド型リボザイムを設計し、活性を調べたところ、従来のものに比べて活性が上昇することがわかった。2.バクテリオファ-ジT4RNAの自己切断部位に対応するRNAのミニル-プを化学合成し、切断部位を同定した。3.ハンマ-ヘッド型リボザイムのNMRによる構造解析ハンマ-ヘッド型リボザイムのステム部分を化学合成し、NMRによってイミノプロトンを解析することにより水素結合を証明した。必須配列中の二つのグアノシンをイノシンに置換することにより、2位のアミノ基が活性に必要なことを見出した。4.ハンマ-ヘッド型リボザイムの結晶化ハンマ-ヘッド型リボザイムのル-プ部分の三次元構造を知るためには、X線解析による構造解析が必要であるので今年度は結晶化を試み、微少結晶を得た。

1. RNA の with column と specific cut RNA の column specific cut method の つ と し て RNaseH を with い る occasions, ハ イ ブ リ ダ イ ズ さ せ る DNA fill phase lock を 4 salt base と し, struck に 2 'ー O ー メ チ ル ヌ ク レ オ チ ド を combining さ せ る こ と に よ っ て cut を qualified で き る が, higher order structure を つ tRNA に polices し て は long fill phase lock lock を ハ イ ブ リ ダ イ ズ さ せ る こ と に よ っ て, sharper rate よ く anti 応 が for す る こ と を shows し た. こ れ を with い て tRNA み の group in え を い, 蛍 light プ ロ - ブ の import line を っ た. リ ボ ザ イ ム を with い る match column specific cut の tectonic active phase masato を adjustable べ る た め に, stable な ル - プ を hold つ ハ ン マ - ヘ ッ ド type リ ボ ザ イ ム し を design, active を べ た と こ ろ, 従 の も の に than べ て active が rise す る こ と が わ か っ た. 2. バ ク テ リ オ フ ァ - ジ T4RNA の cut off your positions に 応 seaborne す る RNA の ミ ニ ル - プ を chemical synthesis し, cut off the part を with し た. Type 3. ハ ン マ - ヘ ッ ド リ ボ ザ イ ム の NMR に よ る structure ハ ン マ - ヘ ッ ド type リ ボ ザ イ ム の ス テ ム を chemical synthetic し, NMR に よ っ て イ ミ ノ プ ロ ト ン を parsing す る こ と に よ り water element combination を prove し た. Must match column の two つ の グ ア ノ シ ン を イ ノ シ ン に replacement す る こ と に よ り, two の ア ミ ノ base が active に necessary な こ と を shows し た. 4. ハ ン マ - ヘ ッ ド type リ ボ ザ イ ム の crystallization ハ ン マ - ヘ ッ ド type リ ボ ザ イ ム の ル - part プ の three yuan structure を know る た め に は, X-ray analytical に よ る structure が necessary で あ る の で our は crystallization を み, fractional crystallization を た.

项目成果

H.Hosaka: "Cleavage Reaction of a Synthetic Oligoribonucleotide Corresponding to the Autocleavage Site of a Precursor RNA from Bacteriophase T4." FEBS Letters. 293. 204-206 (1991)

H.Hosaka：“与来自细菌相 T4 的前体 RNA 自裂解位点相对应的合成寡糖核苷酸的裂解反应。”

A.Murakami: "Fluorescein-Labeled Oligonucleotide Probe:Detection of Hybrid Formation in Solution by Fluorescence Polarization Spectroscopy." Nucleic Acids Research. 19. 4097-4102 (1991)

A.Murakami：“荧光素标记的寡核苷酸探针：通过荧光偏振光谱检测溶液中的杂交形成。”

Makoto Koizumi: "Effects of Phosphorothioate and 2-Amino Groups in Hammerhead Ribozymes on Cleavage Rates and Mg^<2+> Binding" Biochemistry. 30. 5145-5150 (1991)

Makoto Koizumi：“锤头核酶中硫代磷酸酯和 2-氨基对裂解率和 Mg^<2 > 结合的影响”生物化学。