紫外線誘発DNA損傷による発癌遺伝子活性化に関する研究-化学合成オリゴヌクレオチドを用いた部位特異的導入法によるアプローチ

紫外线诱导的 DNA 损伤导致致癌基因激活的研究——一种使用化学合成寡核苷酸进行位点特异性引入的方法

• 批准号: 05152001
• 负责人: 大塚 栄子
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05152001/
• 关键词: チミンダイマー; 損傷DNA; DNA修復; ras遺伝子; N1H3T3

DNAに生ずるチミンダイマー(TD)には,2種の異性体,cis-syn及びtrans-syn(以下,csTD,tsTDと略す)が存在する.これらを部位特異的にc-Ha-ras遺伝子に導入するために,ras合成遺伝子のコドン61CAAの相補鎖のTTをcsTD,tsTDとした21merを合成し,コドン49から68に対応するDNAカセットを構築した.TDを含むDNAカセットをプラスミドに組み込み,トランスフェクション用ベクターとした.このc-Ha-ras遺伝子を含むベクターをリン酸カルシウム法により,マウスN1H3T3細胞にトランスフェクションした.その結果,正常c-Ha-rasに比較して,高頻度にフォーカスを形成した.さらに,フォーカスを形成した細胞のゲノムのDNAを抽出し,PCR法と制限酵素処理を組み合わせることによりc-Ha-ras遺伝子の配列を解析した.csTDによってトランスフォームしたあるクローンでは,制限酵素切断法により分析すると,コドン61がCTAであることがわかった.また,tsTDにより変異としてはコドン61がCATとなっているものが検出された.c-Ha-ras遺伝子のホットスポットの一つである61番目Glnの部位にチミンダイマーの二つの異性体を導入することにより,チミンが損傷を起こしたことによりtransversionが起こり,Aとなることを証明した.cis-syn型では3'側のチミンの相手側にTを取り込み,trans-syn型では5'側でTを取り込んだ結果CAA(Gln)のところがCTA(Leu)およびCAT(His)となり点突然変異がアミノ酸の置換を引き起こしたことが明らかとなった.したがってDNAの損傷が,がん遺伝子の重要な箇所に起こると,がん化の引き金になることが明らかとなった.

DNAに生ずるチミンダイマー(TD)には, 2 kinds of opposite sex, cis-syn and びtrans-syn ( Below, csTD, tsTD (slightly) exist and the site-specific c-Ha-ras legacy is introduced.ために,rassynthetic legacy 伝子のコドン61CAAのphase complementary lockのTTをcsTD,tsTDとした21merをSynthetic,コドン49から68に対応するDNAカセットをconstructedした.TDをcontainingむDNAカセットをプラスミドに组み込み,トランスフェクション用ベクターとした.このc-Ha-ras伝子を contain むベクターをリン acid カルシウム method により, マウスN1H3T3 cells にトランスフェクションした.その results, normal c-H a-ras に に し て, high frequency に フ ォ ー カ ス を formed し た. NA extraction, PCR method and restriction enzyme treatment group combination analysisた.csTDによってトランスフォームしたあるクローンでは, restriction enzyme cutting method により analysis すると,コドン61がCTAであることがわかった.また,tsTDにより変同としてはコドン61がCATとなっているものが検出された.c-Ha-ras伝子のホットスポットの一つである61 GlnのpartsにチミTransvers ionがriseこり,Aとなることをprovenした.cis-syn typeでは3'lateralのチミンのphase hand sideにTをtakeり込み,trans-syn typeでは5' sideでTをtakeり込んだresult CAA(Gln)のところがCTA(Leu)およびCAT (His) となりPoint suddenly changed がアミノ acid の substitution をinduced こしたことが明らかとなった.したがってDNA damageが,がん伝子の Importantな箇所に出こると,がん化のInductionき金になることが明らかとなった.

项目成果

Eiko Ohtsuka: "Cyclobutane thymine dimers in a ras proto-oncogene hot spot activate the gene by point mutation." Nucleic Acids Research. 21. 2355-2361 (1993)

Eiko Ohtsuka：“ras 原癌基因热点中的环丁烷胸腺嘧啶二聚体通过点突变激活该基因。”