機能の創生を目指すオリゴヌクレオチドの化学合成

旨在创造功能的寡核苷酸的化学合成

基本信息

批准号：
04226101
负责人：
大塚栄子
金额：
$ 22.91万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ハンマーヘッド型リボザイムの機能構造を知るためには,三次元構造の解析が必要である.ハンマーヘッド型リボザイムのX線結晶解析を目的としたリボザイムの設計と大量合成を行った.また,リボザイムと基質RNA間基塩対の安定性がリボザイムの基質切断に影響を与えると考えられるので,リボザイム反応の効率化を目的としたリボザイムの構造と活性の相関の研究を行った.リボザイムによって標的RNAが切断される場合1)リボザイム/基質複合体の形成,基質の切断,2)切断反応後の生成物の解離,3)リボザイムへの基質の結合,と言うサイクルをとる.このため,効率のよい切断反応を行わせるためには,標的RNAと複合体を形成しやすく,かつ切断反応後の生成物が速やかに解離がするように,適当な長さのステムIとステムIIIを形成するようなリボザイムをデザインした.リボザイム基質間で形成する塩基対数を変え,これらの切断活性とリボザイム/基質複合体の安定性について検討を行った.熱力学的に安定なC(UUCG)Gヘアピンループをステム3に含むハンマーヘッドリボザイムを活性型がん遺伝子c-Ha-ras mRNAを切断するように設計し,in vitroで鎖長15のmRNAの部分を切断したところ,A(UAG)Uループを持つものとほぼ同様の切断速度を示した.in vivoの実験でもほぼ同様の結果であった.結晶化を目的としたリボザイム・基質complexとしては基質の高次構造を少なくすると同時に切断部位に2'-O-メチルまたはフッ素を置換したGGUC(X)UAGCAと二本鎖酵素の大量合成を行った.

要了解锤头核酶的功能结构，需要分析三维结构。我们为锤头核酶的X射线晶体学设计了核酶，并进行了质量合成。此外，由于核酶和基底RNA碱基盐对的稳定性被认为会影响核酶的底物裂解，因此我们研究了核酶的结构和活性之间的相关性，旨在提高核酶反应的效率。当靶RNA通过核酶裂解1）形成核酶/底物复合物，底物的裂解，2）裂解反应后产物的解离，3）因此，为了进行有效的裂解反应，为了使核糖酶与靶rNA形成复合物，并在裂解后脱离了裂解反应，并在裂解后脱离了裂解。核酶底物之间形成的碱基对变化，并研究了裂解活性和核酶/底物复合物的稳定性。在茎3中含有热力学稳定C（UUCG）G发夹环的锤头核酶用于创建活性的癌症基因C-HA-RAS。将mRNA设计为裂解mRNA，当在体外裂解15的mRNA部分时，切割速率与A（UAG）U循环的裂解速率几乎相同。在体内实验中结果相似。作为结晶的核酶底物络合物，底物的大小降低，GGUC（X）UAGCA的质量合成，在切割位点取代了2'-O-O-甲基或氟。