DNA複製関連遺伝子の分子生物学

DNA复制相关基因的分子生物学

• 批准号: 06256224
• 负责人: 山口 政光
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Aichi Cancer Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06256224/
• 关键词: ショウジョウバエ; マウス; PCNA; DNA複製関連遺伝子; トランスジェニックフライ; 転写調節エレメント

(1)ショウジョウバエPCNA遺伝子発現制御エレメントの個体レベルでの解析:PCNA遺伝子のプロモーターとその上流域を含む種々の配列をlacZ遺伝子と連結し,P-エレメント法により百数十系統の遺伝子導入ハエを樹立し,lacZ発現の変化を調べることにより,各発生段階での発現に必要な制御配列を明らかにした。成虫の卵巣における発現に必須であるのは転写開始点より上流86bp以内の基本プロ-モーターであり、DRE(PCNAおよびDNApolymeraseα遺伝子のプロモーター上流に存在する、共通の8bpのパリンドローム配列)はそれを増強する。初期胚での発現には、DREが必須となり、また幼虫期での発現には、DRE及びそのさらに上流50bpまでにある第2の調節配列(URE:upstream regulatory element)が必要であることがわかった。最近、このUREに特異的に結合するタンパク因子の検出にも成功している。(2)マウスPCNAの構造と機能の相関:PCNAは最近種々のサイクリンやp21と相互作用することが明らかにされ、注目を集めている。in vitro 転写・翻訳系により作製したマウスPCNAの各種欠失変異体と、大腸菌で発現させたマウスDタイプ-サイクリンとGSTとの融合蛋白との結合能を調べた。その結果、261アミノ酸残基からなるPCNAのN-末端領域(2-64番)とC-末端領域(197-228番)にそれぞれ独立に機能する結合領域をマップした。興味深いことにこれらの領域は、哺乳動物からショウジョウバエさらに出芽酵母のPCNAにいたるまで、最もよく保存されている領域に相当している。

(1) シ ョ ウ ジ ョ ウ バ エ PCNA posthumous son 伝 発 now suppression エ レ メ ン ト の individual レ ベ ル で の analytic: PCNA posthumous son 伝 の プ ロ モ ー タ ー と そ の on basin を む 々 species. の match column を lacZ heritage 伝 と link し, P - エ レ メ ン ト method に よ り hundreds of dozens of system の heritage 伝 son import ハ エ を establish し, lacZ 発 is の を adjustable べ variations る こ と に よ り, each 発 Duan Jie で の 発 に now necessary な suppression with column を Ming ら か に し た. Adult の eggs 巣 に お け る 発 に must now で あ る の は planning write starting point よ り upper within 86 bp の basic プ ロ - モ ー タ ー で あ り, DRE (PCNA お よ び DNApolymerase alpha heritage 伝 son の プ ロ モ ー タ ー upper に exist す る, common の 8 bp の パ リ ン ド ロ ー ム match column) は そ れ を raised strong す る. Early embryo で の 発 now に は, DRE が must と な り, ま た larval stage で の 発 now に は, DRE and び そ の さ ら に upper 50 bp ま で に あ る の adjustment with 2 columns (URE: upstream regulatory element) が necessary で あ る こ と が わ か っ た. Recently, the <s:1> に UREに specifically combined the に with the するタ パ パ パ <s:1> factor <s:1> 検 and 検 successfully produced に <e:1> and <s:1> て る る る る. (2) マ ウ ス PCNA の function of tectonic と の phase masato: PCNA は recently kind 々 の サ イ ク リ ン や p21 と interaction す る こ と が Ming ら か に さ れ, striking を set め て い る. The in vitro planning to write, turn 訳 department に よ り cropping し た マ ウ ス PCNA の owe lost - foreign と, coliform で 発 now さ せ た マ ウ ス D タ イ プ - サ イ ク リ ン と GST と の fusion protein と の binding energy を adjustable べ た. そ の results, 261 ア ミ ノ acid residues か ら な る PCNA の N - terminal area (2-64's) と C - end areas (197-228 times) に そ れ ぞ れ function of independent に す る combining domain を マ ッ プ し た. Takes deep い こ と に こ れ ら の は, mammals か ら シ ョ ウ ジ ョ ウ バ エ さ ら に budding yeast の PCNA に い た る ま で, most も よ く save さ れ て い る field に quite し て い る.