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DNA複製関連遺伝子の分子生物学

DNA复制相关基因的分子生物学

基本信息

批准号：
05263234
负责人：
山口政光
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Aichi Cancer Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)ショウジョウバエPCNA(DNAポリメラーゼdelta補助因子)遺伝子発現制御エレメントの個体レベルでの解析:PCNA遺伝子のプロモーターとその上流域を含む種々の配列をlacZ遺伝子と連結し,P-エレメント法により多数の遺伝子導入ハエを作成し,lacZ発現の変化を調べることにより、発生段階特異的な発現にとって必要な制御配列を明らかにしつつある。卵巣における発現に必須であるのは転写開始点より上流86bp以内の基本プロモーターであり、DRE(PCNAおよびDNApolymerase alpha遺伝子のプロモーター上流に存在する、共通の8bpのパリンドローム配列)はそれを増強する。初期胚での転写には、DREが必須となり、さらに幼虫期での発現には、DREおよびそのさらに上流50bpまでにある第2の調節配列が必要であることがわかった。(2)DREに結合する転写因子DREFのcDNA及び遺伝子のクローニング:DREFをDNAラテックス粒子を利用して精製し、部分アミノ酸配列を決定し、リバースPCR法にてcDNAと遺伝子を単離した。DREFcDNAは2193bpのORFを有し、731アミノ酸残基よりなる83kDaのタンパク質を支配する。アミノ酸配列には既知のタンパク質との類似性は認められない。このタンパク質のN端約1/3は塩基性アミノ酸に富み、中央約1/3は酸性アミノ酸を多く含む。また、両者の間にはプロリンに富む短い領域が存在する。大腸菌で産生した組み換え体DREFを用いて、塩基性アミノ酸に富む領域(46-270番)がDREへの結合ドメインを含むことを証明し、発生過程におけるDREFmRNA量の変化がDNA polymerse alpha、epsilonやPCNA等の複製遺伝子のそれとほぼ一致することを見い出した。この結果はDREF遺伝子発現量の変化がDNA複製遺伝子の基本的な発現にとって重要性を持つことを示唆する。なおDREF遺伝子の染色体座位は30F〜31Aにマップされた。

(1) Serotype PCNA (DNA ポリメラーゼdelta subsidy factor) legacy productメントのIndividual レベルでの Analysis:PCNA legacy 伝子のプロモーターとそのupper basin をcontaining むkind 々のmatching arrangement をl acZ伝子とconnectionし,P-エレメント法により多の缝子 Imported by ハエを成し,lacZ発appearの変化を动べることにより, and the stage-specific な発appears にとってessential な淪狠目出らかにしつつある. It is necessary to write the starting point of the basic DNA polymerase within 86bp, DRE (PCNA DNApolymerase) The alpha-remaining son's high-ranking existence is the same, and the common 8bp's 8bp's arrangement is the same as the strong one. Initial embryo is written by での転には, DRE is necessary by となり, larval stage is written by での発appears by には, DRE is およびそのさらにUpstream 50bp までにあるThe second の adjustment arrangement is necessary であることがわかった. (2) DRE binding factor DREF DNA and DNA factor DREF DNA The particle size is refined, part of the acid composition is determined, and the PCR method is based on cDNA isolation. DREFcDNA has a 2193 bp ORF and a 731 amino acid residue and a 83 kDa DNA. The similarity of the aminic acid composition to the known のタンパク quality and the similarity to the められない. The N-terminal part of the このタンパク性の is about 1/3 of the basic アミノ acid に富み, and the middle part is about 1/3 of the acidic アミノ acid を多くむ.また、両者の间にはプロリンに富む Short い地がexistent する. The coliforms produced by the group are replaced by the body DREF, and the basic amino acid is rich in the field (46-270 times). DRE's combination has been proved, and the development process has been proven, and the amount of DREFmRNA has been changed into DNA. Polymerse alpha, epsilon PCNA, etc. are the same as the ones that are reproduced.このRESULTS は DREF 缝子発现quantification の変化がDNA replication 缝子のBASIC な発现にとってIMPORTANCE をhold つことをshows instigationする. The chromosome locus of NADREF is 30F~31A.