DNA複製関連遺伝子の分子生物学

DNA复制相关基因的分子生物学

• 批准号: 04270226
• 负责人: 山口 政光
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Aichi Cancer Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04270226/
• 关键词: ショウジョウバエ; DNA複製関連遺伝子; 細胞周期; PCNA; DNAポリメラーゼα; トランスジェニックフライ; 転写調節エレメント; 転写因子

本研究の目的は、DNA複製関連遺伝子の発現が、ショウジョウバエの発生過程で、どの様に調節されているかを個体レベルで理解することであり、また発生における細胞増殖と分化の相関関係を明らかにすることである。本年度の成果は以下のように要約できる。(1)ショウジョウバエ初期胚細胞周期におけるPCNA(DNA polymeraseδ補助因子)の動態PCNAは受精後14回目以後の細胞周期においては、S期とG2期には核内に在存するが、M期のprophaseに分解され消失し、次のS期に先だって再び核内に集結してくることを観察した。また、PCNA遺伝子発現調節領域をlacZ遺伝子に連結したプラスミドをX染色体に導入して得たトランスジェニックフライを遺伝的交配によりstring^-(cdc25のホモログ)ホモにすると、全ての細胞が14回目の分裂周期のG2期で停止するが、その状態でもPCNA-lacZがzygoticに発現することを観察した。(2)ショウジョウバエPCNA及びDNAポリメラーゼα遺伝子に共通な転写調節エレメント(DRE:DNA replication-related element)の個体レベルでの解析PCNAプロモーターをlacZ遺伝子に融合したPエレメントプラスミドをもとにして、DREに種々の変異を導入したものをもちいて、合計77系統のトランスジェニックフライを新たに樹立した。それらの解析はまだ途上にあるが、DREの機能について興味ある知見が得られつつある。(3)DREに結合する転写因子DREFの解析DREFを均一標品にまで精製する方法を確立し、その物理化学的性質の解析からDREFが86Kのポリペプチドの2量体として存在することを明らかにした。現在そのcDNAクローニングをめざしてアミノ酸配列の決定を急いでいる。

The aim of this study is to clarify the relationship between gene expression, development and regulation of DNA replication-related genes and cell proliferation and differentiation. The results for the year are as follows: (1)PCNA(DNA polymerase delta helper) was observed in the early embryonic cell cycle after 14 cycles of fertilization, including the first, second, and third phases of the cell cycle. The regulatory domain of PCNA gene expression is lacZ gene linkage, X chromosome introduction, gene transfer, string^-(cdc25) mating, G2 phase cessation of the 14-cycle division cycle, and state of PCNA-lacZ zygotic development. (2)DNA replication-related element (DRE) and PCNA are the common regulatory elements of DNA replication-related element (PCNA) and DNA replication-related element (DRE). The analysis of DRE is not only on the way, but also on the function of DRE (3)DRE binding factor DREF analysis DREF homogeneous standard product purification method to establish, the physical and chemical properties of the analysis DREF 86K from the two quantities of the existence of this clear. Now the cDNA library is in the middle of determining the acid sequence.

项目成果

Yamaguchi,M. etal.: "Activation of the mouse DNA polymerase β gene pormoter by adenovirus type 12 EIA proteins." Nucleic Aciods Res.20. 2321-2325 (1992)

Yamaguchi, M. 等人：“12 型腺病毒 EIA 蛋白激活小鼠 DNA 聚合酶 β 基因启动子。核酸研究 2321-2325 (1992)。

Yamaguchi,M. etal.: "Distribution of DNA polymerare α during nuclear division cycles in Drosophila melanogaster embryo." Cell Struct. Funct.17. 105-112 (1992)

Yamaguchi, M. 等人：“果蝇胚胎核分裂周期中 DNA 聚合酶的分布。”105-112 (1992)。

Yamaguchi,M. etal.: "Activation of the mouse proliferating cell nuclear antigen gene promoter by adenovirus type 12 EIA proteins." Jpn. J. Cancer Res.83. 609-617 (1992)

山口，M.

Hirose,F. etal.: "Novel 8-bp sequence(DRE)and specifie binding factor(DREF)involved in the expression of Drosophila genes for DNA polymerase α and proliherating cell nuclear antigell." J. Biol. Chem,. 268. 2092-2099 (1993)

Hirose, F. 等人：“涉及果蝇 DNA 聚合酶 α 和增殖细胞核抗胶基因表达的新型 8 bp 序列 (DRE) 和特异性结合因子 (DREF)”，《生物化学杂志》268。 2092-2099 (1993)