ショック蛋白質(DnaK,DnaJ,GrpE)による複製開始蛋白質(RepE)の活性化機構

休克蛋白（DnaK、DnaJ、GrpE）激活复制起始蛋白（RepE）的机制

• 批准号: 06261223
• 负责人: 和田 千恵子
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06261223/
• 关键词: 分子シャペロン; 複製開始蛋白質(RepE); 二量体の解離; 分子シャペロンとRepEの複合体

大腸菌の性決定因子であるF及びミニFは染色体あたり約1コピーで保持されている。このコピー数調節において複製開始蛋白質(RepE)の役割は大きい。RepEの二つの機能(イニシエーター、リプレッサー)が各々単量体と二量体に対応しており、イニシエーター/リプレッサーの機能変換が単量体と二量体の構造変換として理解できる事を明きらかにした。この二量体から単量体への変換に分子シャペロン(DnaK,DnaJ,GrpE)が関与している可能性を今年度検討した。これが明かになれば、この系は分子シャペロンの作用機構を解析するための優れたモデル系となる。本年度の研究計画と研究実績(1)正常RepEの複製開始領域(DR)、オペレーター(IR)への結合に及ぼすDnaK,DnaJの効果をDR又はIRのDNAをプローブにして精製RepE,DnaK,DnaJを用いてゲルシフトAssayで調べた。正常RepEのDRへの結合能はDnaK,DnaJ,ATPの量に比例してDRへの結合能が増大する事が明らかとなった。(2)細胞粗抽出液からRepEと分子シャペロンとの複合体をニッケルアフィニティカラム、架橋剤を用いて見つけることが出来た。UVクロスリンカーによる方法も試みる予定をしている。(3)RepEの種々の変異体を用いて分子シャペロン(DnaK,DnaJ)との複合体の形成能を調べることにより、RepEの分子シャペロンとの相互作用領域を決定した。(4)RepEの二量体/単量体の変換におけるDnaK,DnaJ,GrpEの役割を再構成系を作り調べる。この研究は試験管内でRepEの二量体、DnaK,DnaJ,GrpEを反応し、グリセロール濃度勾配遠心法によりRepEの単量体の形成を調べる試みをしたが、卓上超遠心機がないために、試料が多量にいるために充分な条件を決定することが出来なかった。

E. coli sex determinants The number of copies of the protein (RepE) is regulated. RepE's two-dimensional function (i.e., high-resolution) is to change the structure of each single volume and two volumes. This year, we will discuss the possibility of changing the molecular structure of these two molecules (DnaK, DnaJ, GrpE). The mechanism of action of the molecule is analyzed. This year's research plan and achievements (1) normal RepE replication initiation domain (DR), selection domain (IR) binding domain and DnaK, DnaJ replication domain (DR), DnaK, DnaJ replication domain (IR) binding domain (DR), DnaK, DnaJ replication domain (DR), DnaK, DnaJ replication domain (IR) binding domain (DR), DnaK, DnaJ replication domain (IR), DnaK, DnaJ replication domain (DR), DnaK, DnaJ replication domain (IR), DnaK, DnaJ replication domain (DR), DnaK, DnaJ replication domain (IR), DnaK, DnaJ replication domain (DR), DnaK, DnaJ replication domain (IR), DnaK, DnaJ replication domain (DR), DnaK, DnaJ replication domain (DR), DnaK, DnaJ replication domain (IR), DnaK, DnaJ replication domain (DR), DnaK, DnaJ replication domain (DR), DnaJ The binding energy of DR in normal RepE is proportional to the amount of DnaK, DnaJ, ATP, and the binding energy of DR increases. (2)The complex of RepE and molecular molecules in the crude extract of cells can be seen in the use of bridging agents. The method for determining the UV spectrum is as follows: (3) The interaction domain of RepE molecules in the complex formation can be determined by the molecular structure of RepE. (4) RepE's binary/unbinary conversion is regulated by DnaK, DnaJ, GrpE's service recombination system. This study was conducted to determine the sufficient conditions for the formation of RepE units in the tube, such as the concentration of RepE, DnaK, DnaJ and GrpE, and the concentration of RepE in the tube.