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分子シヤペロンによるDNA複製開始タンパク質(RepE)の活性化の分子機構:RepE-分子シャペロン複合体の構造解析と形成機構及びRepE二量体ドメインの構造解析

分子伴侣激活DNA复制起始蛋白(RepE)的分子机制：RepE-分子伴侣复合物的结构分析和形成机制以及RepE二聚体结构域的结构分析

基本信息

批准号：
14037235
负责人：
和田千恵子
金额：
$ 3.01万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

大腸菌を宿主として増殖するミニFプラスミドの複製開始タンパク質RepEは二つの機能・すなわち複製開始因子として、二つ目にはrepE遺伝子の自己転写抑制因子として働く。前者はRepE単量体が、後者はRepE二量体が機能する。二量体から単量体への変換はDnaK分子シャペロンによって行われることを我々は明らかにした。この変換機構の詳細を分子レベルで明らかにするのが本研究の目的である。平成14年度は3つの課題を予定していたが、二つの課題について研究実績を報告する。(1)分子シャペロンとの相互作用が出来なくなったRepE変異体を分離し、それらの変異体の解析によりDnaK分子シャペロンとの相互作用領域を決める。新たに16個の変異体をPCR mutagenesisを用いて、分離した。これらの変異体の自己転写抑制活性は正常であり、二量体は形成できるが、オリジンの繰り返し配列には結合出来ない性質を示すものとして分離した。さらにこれらの変異体の変異位置を決めた。N末ドメインに変異が位置づけられた。今後DnaK, DnaJ, GrpEとこれら変異RepEの間の相互作用を調べる予定である。(2)RepE二量体の結晶化と構造解析。正常RepE二量体はタンパク質が凝集しやすく結晶化が困難であるから、N末ドメイン(分子量約15kD)の結晶化を試みた。この断片RepEタンパク質は二量体であることを二つの方法を用いて、確かめた。また結晶化に成功した。現在、解像度が上げる試み、重原子を入れる試みをしている。次に構造解析を行う。

The host of the giant fungus is not responsible for the start of RepE replication, and the second machine is able to copy the start factor of replication and write the inhibitory factor of its own for the second time. The former was measured by RepE, and the latter by RepE. The binary body is called DnaK molecule, which is called the molecular weight of the molecule. The organization of this study is responsible for the understanding of the purpose of this study. In Pingcheng, the annual 3-year project is expected to be completed, and the second-year project is scheduled to be completed. (1) the molecular interaction is determined by the separation of RepE molecules and the analysis of the interaction field of DnaK molecules. There are 16 new models in which PCR mutagenesis are used and separated from each other. The inhibitory activity is normal, the two-dimensional body is formed, and the configuration is combined to show that the inhibitory activity is normal, that is, the inhibitory activity is normal, the binary body is formed, and the configuration is combined with each other. I don't know. I don't know. I don't know. At the end of the day, the location is very small. In the future, DnaK, DnaJ, GrpE will determine the RepE interaction between each other. (2) the crystallization and analysis of RepE binary structure. The normal RepE two-dimensional agglutination test was used to crystallize the RepE two-dimensional agglutination test, the N-terminal molecular weight (molecular weight is about 15kD) to crystallize. The fragment RepE was used to make sure that the two-dimensional method was used to determine the accuracy. The result was successfully crystallized. Now, in terms of resolution, heavy atoms are trapped and the heavy atoms are trapped. This is the second time to create an analytical line.