GPI結合型タンパク質の糖鎖の多様性の意義

GPI 连接蛋白中聚糖多样性的意义

• 批准号: 06267218
• 负责人: 富田 基郎
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06267218/
• 关键词: GPI糖鎖; 糖鎖構造; グリコシルホスファチジルイノシトール; CD59; 蛍光標識

GPI結合型膜タンパク質のGPI部位の糖鎖構造に関して,哺乳動物由来のものは量が得られないために,原虫由来のものとの比較により構造推定しているのが現状である。そして哺乳動物由来GPI糖鎖がどの程度構造多様性を示すか,同一細胞の異なったGPI型膜タンパク質のGPI部位が同じかなどの点は,また余り解析されていない。そこで蛍光標識法を用いて,GPI型糖鎖の高感度な簡便解析技術の開発を試みた。GPI糖鎖の蛍光標識には2種類の方法が考えられる。第一はエタノールアミンとグルコサミンのアミノ基をダンシル試薬と反応させる方法。第二はGPI型鎖を亜硝酸分解してグルコサミン残基を2,5-アンヒドロマンノースとして,次にピリジルアミノ化する方法である。両法とも実際の試料に当てはめて検討した。試料にはヒト尿由来の水溶性CD59を用いた。まずこの糖鎖を従来法で糖鎖構造を多様性まで決定した(研究発表論文1に発表)。次にCD59をダンシル化した後,HPLCにて単離して、これをプロナーゼ消化して蛍光標識GPI糖鎖部を分子ふるいクロマトグラフィーで精製した。この標品はHPLCで数本のピークに分離した。現在各ピークが,先に構造決定したどの構造に対応するかを解析している。第二のピリジルアミノ化法についても検討した。CD59の亜硝酸分解物を脱塩してから常法に準じてピリジルアミノ化した。次いでプロナーゼ消化後,HPLC精製を行ったところ、極めて複雑な溶出パターンを示した。CD59を亜硝酸分せずにピリジルアミノ化した場合には、蛍光標識強度は,亜硝酸分解試料と較べて1%以下であったので、亜硝酸分解が複雑な蛍光標識パターンを示す原因であることを強く示唆した。現在さらに原因を解析中であるが,本法はGPI糖鎖分析には適さないと暫定的に結論した。

GPI binding membrane protein and GPI site sugar lock structure are closely related to the origin of mammals and protozoa. Although the degree of structural diversity in the origin of GPI sugar locks in mammals has been shown, the GPI sites of different GPI-type membranes in the same cell are the same, which makes it difficult to analyze the differences. In this paper, we try to develop a simple and sensitive analytical technique for GPI type carbohydrate chains. GPI sugar lock light identification is two kinds of methods to test. The first method is to reduce the cost of the project by reducing the cost of the project. The second type of GPI lock is the nitric acid decomposition of the 2,5-amino acid residue, and the second type of GPI lock is the method of hydrolysis. The test results are presented in the table below. The sample is water-soluble in CD59. A new method to determine the diversity of glycan structure is proposed in this paper. After the purification of CD59, the GPI was purified by HPLC. The standard was separated by HPLC. Now, the structure of the first decision, the structure of the first analysis The second is to reduce the number of cases. CD59 Nitric acid decomposition products are removed from the normal process. After secondary digestion,HPLC purification was carried out, and the dissolution rate was determined. CD59: Nitric acid decomposition test sample is less than 1%, and the light intensity is less than 1%, and the light intensity is less than 1%. Now, the reason analysis is in the middle, and this method is in the middle of the GPI sugar lock analysis.