抗体に高機能性を付与する新たなN-結合型糖鎖構造のデザイン

设计一种新的 N 连接糖链结构，赋予抗体高功能

• 批准号: 22K06143
• 负责人: 梶浦 裕之
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06143/
• 关键词: 糖鎖工学; N-結合型糖鎖; 糖転移酵素; 植物での一過的発現; 抗体; エフェクター機能; 糖鎖

本年度はまず、本課題で使用する抗体上のN-結合型糖鎖の非還元末端側への糖転移に必要な動物、植物、昆虫由来の糖転移酵素を3種類取得した。植物(Nicotiana benthamiana、ベンサミアナタバコ)を宿主とし、取得したそれぞれの糖転移酵素をモデル抗体とアグロインフィルトレーションにより一過的に共発現させ、その抗体上のN-結合型糖鎖構造の改変を試みた。その結果、共発現した糖転移酵素が機能したことにより植物内では通常生合成されないN-結合型糖鎖構造がモデル抗体上で確認できたが、異種糖転移酵素を単純に植物に導入するだけでは効率よく抗体上のN-結合型糖鎖構造を目的の構造に改変するには不十分であることも確認できた。同時に、植物由来の糖転移酵素の導入(過剰発現)では、植物内在性の酵素によるN-結合型糖鎖修飾を加速させ、目的とする構造のN-結合型糖鎖を合成できない問題点も見出した。次に細胞内、特にゴルジ体局在を制御するそれぞれの糖転移酵素上の局在化因子を植物由来のゴルジ体局在化因子に置換したキメラ糖転移酵素発現用コンストラクトを合計21種類作製した。そのうち7種類のキメラ糖転移酵素をそれぞれモデル抗体とベンサミアナタバコでアグロインフィルトレーションにより一過的に共発現させ、モデル抗体の発現を確認した。発現が確認できたモデル抗体をベンサミアナタバコの葉からプロテインAカラムを用いて精製し、次年度以降にN-結合型糖鎖構造解析が実施できる量を確保した。

This year's experiment and this project use antibodies to detect N-conjugated non-terminal glycosaminoglycans to transfer essential substances such as animals, plants and insects. The plant (Nicotiana benthamiana) hosts the virus, obtains the glycosyltransferase (transferase), detects the antibody (s), detects the antibody (s), and uses N-binding glycogen on the antibody to make a modified test. According to the results of the results, it was found that the mechanism of glucosyltransferase was able to synthesize the enzyme N-conjugated sugar in the plant, and the N-conjugated glycogen was detected on the positive antibody and the N-conjugated enzyme on the antibody. The purpose of the production of N-conjugated glucose in the antibody is not very reliable. At the same time, plant-derived glucose transfer enzymes were introduced into the enzyme, plant intrinsic enzyme enzyme N-combined sugar repair was accelerated, and the problem of N-conjugated sugar synthesis was detected. In the second part of this paper, the production of glucose transferase is studied in the field of chemical factors, plant origin, chemical factors, sugar transfer enzymes, glucose transfer enzymes, enzymes, enzymes. This is the first step in the detection of glucose transfer enzymes, such as glucose transfer enzymes, antigens, antibodies, enzymes, enzymes, Please make sure that the antibodies

项目成果

新規なシグナルペプチドを利用した、植物における組換えタンパク質の分泌生産

使用新型信号肽在植物中分泌生产重组蛋白

• 发表时间: 2022
• 作者: 山本 佳奈;梶浦 裕之;三﨑 亮;藤山 和仁
• 通讯作者: 藤山 和仁

植物を用いたタンパク質生産の過去と現在

使用植物生产蛋白质的过去和现在

• 发表时间: 2022
• 作者: Dua Nguyen;Hiroyuki Kajiura;Ryo Misaki;Kazuhito Fujiyama;梶浦裕之
• 通讯作者: 梶浦裕之

N-glycan engineering of antibody in Nicotiana benthamiana

本塞姆氏烟草抗体的 N-聚糖工程

• 发表时间: 2023
• 作者: Dua Nguyen;Hiroyuki Kajiura;Ryo Misaki;Kazuhito Fujiyama
• 通讯作者: Kazuhito Fujiyama

Impact of glycoengineering and antidrug antibodies on the anticancer activity of a plant-made lectin-Fc fusion protein.

• DOI: 10.1111/pbi.13902
• 发表时间: 2022-11
• 期刊: PLANT BIOTECHNOLOGY JOURNAL
• 影响因子: 13.8
• 作者: Dent, Matthew;Mayer, Katarina L.;Garcia, Noel Verjan;Guo, Haixun;Kajiura, Hiroyuki;Fujiyama, Kazuhito;Matoba, Nobuyuki
• 通讯作者: Matoba, Nobuyuki