心肥大と心拡大の分化機序

心脏肥大与心脏扩大的分化机制

• 批准号: 06274202
• 负责人: 友池 仁暢
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06274202/
• 关键词: 遺伝子導入; ヒトANP遺伝子; 遺伝子発現; 心筋肥大

家兎生体心へのヒトANP遺伝子の導入(1)ヒト心臓cDNAライブラリーのANPマップに準拠してプライマーを決め、PCR法を用いてヒトANPcDNAを作成した。さらにcytomegalovirus(CMV)プロモーターを有する発現型ベクターpCR/CMVにANPcDNAを組み込み、宿主細胞(大腸菌)にトランスフォームして増殖させた。大腸菌を大量に培養した後、プラスミドを調整し、リン酸カルシウム法を用いてヒトpRc-hANPをトランスフェクションしG418でクローンを選択した。ANPmRNAの発現はNorthern blot analysisで、ANP蛋白の合成は免疫抗体法で確認することができた。(2)家兎を清潔手術下に開胸し、心外膜を切開して心臓を露出せしめ、pRC-hANPを心室筋内に注入した。術後4日目に心臓を摘出し、グアテジン塩化セシウム法を用いてtotal RNAを抽出し1.2%アガロースゲルで電気泳動後,ナイロンメンブレンにブロッティングした。ANPcDNAをプローブにしてハイブリダイゼイションを行ったところ、明らかなANPmRNA遺伝子の発現を認めた。一部の心臓については4%パラフォルムアルデヒドで固定の後パラフィン包理を行ない薄切標本を作製した。anti ANPを一次抗体としてABC法を用いて組織染色を行ったところ、pRc-hANP注入部の心筋細胞にANPの局在を認めた。従って、ヒトANP遺伝子を家兎心臓に注入する事でANPmRNAの発現とANP蛋白合成が可能なことが明らかになった。

The introduction of ANP gene in vivo (1) The preparation of ANP cDNA by PCR Cytomegalovirus(CMV) is a virus that can be detected by pCR/CMV and can be cloned into host cells (E. coli). After a large amount of E. coli culture, the growth of E. coli was adjusted, and the growth of E. coli was adjusted by pRc-hANP. ANP mRNA expression was confirmed by Northern blot analysis, ANP protein synthesis was confirmed by immunoantibody assay. (2)Home cleaning surgery under the thoracotomy, epicardial incision, heart exposure, pRC-hANP, ventricular tendon injection 4 days after operation, the total RNA was extracted by the method of extraction, and the total RNA was extracted by 1.2% of the total RNA. ANP cDNA gene expression is very important to the development of ANP mRNA. A part of the heart. Anti-ANP primary antibody and ABC method were used for tissue staining, and pRc-hANP was injected into the heart muscle cells. ANP mRNA expression and ANP protein synthesis are possible due to the injection of ANP gene into the heart of the patient.

项目成果

Tomoike H: "Cardiac Adaptation and Failure" Springer Verlag, 392 (1994)

Tomoike H：“心脏适应和衰竭”Springer Verlag，392（1994）

Takeishi Y,et al.: "Adenosine-induced heterogeneous perfusion accompanies myocardial ischemia in the presence of advanced coronary disease." Am Heart J. 127. (1994)

Takeishi Y 等人：“在晚期冠心病的情况下，腺苷诱导的异质灌注会伴随心肌缺血。”

Noma M,et al.: "Collaterial development induced by repetitive brief coronary occlusion relates to the functional state of pre-existing collaterals." Jpn Circ J. 58. (1994)

Noma M 等人：“重复性短暂冠状动脉闭塞引起的侧支循环发育与先前存在的侧支循环的功能状态有关。”

Endo T, et al.: "Relation of principal components of ECG maps to loci of wall motion abnormality in old myocardial infarction." Am J Physiol. 266. 1604-1609 (1994)

Endo T 等人：“心电图主要成分与陈旧性心肌梗塞中室壁运动异常位点的关系。”