増殖因子からの信号伝達を担うCRK蛋白の下流因子の同定

鉴定负责生长因子信号转导的 CRK 蛋白下游因子

• 批准号: 06281266
• 负责人: 松田 道行
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: 国立予防衛生研究所
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06281266/
• 关键词: チロシンキナーゼ; Ras; CRK

方法および結果1.CRK蛋白のSH3領域をGST融合蛋白として、大腸菌で発現させ、それをプローブとしてウエストウエスタンブロッティングを行なう。この際、我々の開発した抗GSTモノクローナル抗体を用いることにより、特異性を高めうる事を発見した。2.上記の方法により、細胞質中にCRKのSH3領域と結合する蛋白は、分子量130-140,160,180,220kDaの4ないし5個の蛋白である事が明らかとなった。3.上記の方法を用いて発現ライブラリーをスクリーニングすることにより、上記の全ての蛋白のcDNAクローニングに成功した。4.130-140kDa蛋白はRas近縁のGTP結合蛋白の活性化因子であることがわかったので、CRK binding Guanine nucleotide exchanging proteinよりC3Gと命名した。本蛋白の遺伝子は染色体9q34.3に存在する事を見つけた。5.180kDa蛋白は未知の信号伝達因子で、Downstream factor of CRKよりDOCK180と命名した。核酸配列上も既知の蛋白と有意の相同性が無く、新たなるチロシンキナーゼにより活性化される酵素群の存在が示唆された。6.Ras活性化因子として知られるSos蛋白もCRKのSH3領域に結合する事が、明らかになった。考察本研究によって、二つの非常に重要な癌遺伝子産物であるチロシンキナーゼ群とrasとの間にCRK蛋白が介在することが明かとなり、CRKを含む癌遺伝子産物が増殖刺激伝達系の主要な構成成分であることが判明した。また、幾つかのCRK下流因子が同定されたことにより、CRKを始めとするアダプター分子から、増殖信号が拡散していくことも明らかとなった。今後、これら、ras以外の信号伝達因子が癌化にどの程度関与するのか明らかにしていく予定である。

Methods and Results 1. GST fusion protein in SH3 domain of CRK protein was developed in E. coli. At this time, we have developed anti-GST antibodies that are highly specific. 2. The method described above describes four or five proteins with molecular weights of 130-140,160,180, and 220kDa that bind to CRK in the SH3 domain of the cytoplasm. 3. The method described above was successfully used to develop a complete cDNA library of protein. 4. The 130 -140kDa protein was named CRK binding Guanine nucleotide exchanging protein. This protein gene is present on chromosome 9q34.3. 5.180kDa protein is unknown signal transmission factor, Downstream factor of CRK DOCK180 The presence of a group of enzymes that are known to be identical to each other in nucleic acid sequences is not detected. 6. Ras activation factors are known to bind to SOs protein, CRK and SH3 domains. In this study, we investigated the major components of CRK protein mediated by two very important cancer gene products, namely CRK and CRK, and identified the major components of CRK protein mediated by two very important cancer gene products. CRK downflow factor is constant, CRK starts to increase, and CRK increases. In the future, signal transmission factors other than ras are related to the degree of cancer.