遺伝子導入動物を用いたRas活性化因子C3Gの解析

使用转基因动物分析 Ras 激活剂 C3G

• 批准号: 07272248
• 负责人: 松田 道行
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: 国立予防衛生研究所
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07272248/
• 关键词: Ras; Rapl; CRK; チロシンキナーゼ

Crk蛋白に結合するグアニンヌクレオチド交換因子C3Gの解析を行なった。まず、試験管内でC3Gの標的特異性を決定するために、C3Gをバキュロウイルスを用いて作製し、精製した。さらに、Rasファミリー蛋白を大腸菌およびバキュロウイルスを用いて作製し、試験管内でC3Gよるグアニンヌクレオチド交換反応をおこさせた。その結果、C3GはRap1を特異的に活性化する事が判明した。C3Gを欠損するマウス作製のために、まず、ES細胞に相同組み替えをおこさせた。その結果、600個のESクローンのうち、3つに相同組み替えを認めた。このうち、2種類をマウス受精卵に導入し、2系統のC3G欠損マウスを得た。ヘテロの欠損では、現在までのところ、明らかな以上は認めていない。ヘテロ欠損マウス間の交配にて、ホモ欠損マウスの作製を試みたが、生まれては来なかった。そこで、胎児の解析を行なったところ、受精後4.5日までは、ホモ欠損体も全く正常に発生する。この受精卵をさらに試験管内で2日培養したが、全く正常であった。着床後の形態を観察したところ、4個に1個の割合で、胎盤形成不全が認められ、これが、ホモ欠損体が生まれてこない原因と推察された。さらに、このC3G欠損が異常の原因であることを証明するために、ヒトC3Gを発現するマウスを作製し、交配させたところ、マウスC3Gをホモに欠損するマウスが生まれた。従って、C3Gの欠損が、発生異常の原因であると結論された。

Analysis of Crk protein binding to C3G The specificity of C3G in the test tube is determined by the use of C3G in the preparation and refinement of C3G. In addition, Ras protein can be used to control the growth of E. coli and to test the growth of E. coli in vitro. As a result, C3G was able to identify the specific activation of Rap1. C3G is the same group of cells as C3G. The result is: 600 pieces of ES, 3 pieces of the same group, and 3 pieces of ES. 2 kinds of fertilized eggs are introduced, 2 kinds of C3G are not damaged. In the past, the number of people who have lost their lives has been reduced. For example, if you want to make a mistake, you can make a mistake. The fetus was born normally 4.5 days after fertilization. The fertilized eggs were cultured in the test tube for 2 days, and all the eggs were normal. After implantation, the morphology was observed and the reasons for incomplete placenta formation were investigated. The reason for the abnormality of C3G is to prove that C3G is not damaged. The reason of C3G's failure and abnormal occurrence is concluded.

项目成果

Matsuda, M: "Emerging partners of the CRK oneogene product" Cellular Signalling. 8. (1996)

Matsuda, M：“CRK oneogene 产品的新兴合作伙伴”细胞信号传导。