课题基金 / 基金详情

メカニズムの理解にもとづく標的遺伝子組換えの改良

メカニズムの理解にもとづく標的遺伝子組換えの改良
基于对机制的理解改进靶向基因重组
批准号：
07260205
负责人：
小林 一三
金额：
$1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1995 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07260205/
关键词：
遺伝子ターゲッティング遺伝子治療相同組換アデノウィルスランダムウォーク非相同組換えパピローマrecA

项目摘要

项目成果

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中文摘要
翻译
A.「相同相互作用による非相同組換え」の解析。A-1.マウスでの検出と構造解析。BPVベクターのコトランスフェクションで相同組換えを選択したときに検出される非相同組換え産物の構造解析を進め、BPV複製との関係を示唆する結果を得た。A-2.定量系の確立。「相同相互作用による非相同組換え」産物を特異的に定量できる実験系を作った。これは、大腸菌の優性の薬剤(ストレプトマイシン)感受性遺伝子を逆向きに二つ持つプラスミドを、マウス細胞に導入し、二つの遺伝子が共に失われたものを、大腸菌に導入して薬剤で選択するというものである。A-3.大腸菌での検出。大腸菌の核酸分解酵素欠損株で、ホモロジーの端での非相同組換えを検出した。これは、recA機能に依存していた。B.アデノウイルスペクターで導入した遺伝子による標的遺伝子組換えに伴う非相同組換え。ウシパピローマウイルスプラスミドを染色体外にもつ細胞にドナーの組換えアデノウイルスを感染させ、その間での相同組換えで再構成されたneo+遺伝子を含む細胞のクローンを選択する系で、アデノウイルス部分が組み込まれた産物の解析をシークエンスレベルで行い、非相同組換えを検出した。C.相同組換え効率のホモロジーの長さと程度への依存性の理論の一般化。「中間体の連結部分がホモロジーにそってDNAの塩基対をランダムウォークし、ときに相同組換え体などへとプロセスされる。ホモロジーの端へぶつかれば、ある確率で、中間体が破壊される。」という一般的な場合について、相同組換え体の完成頻度がホモロジーの長さにどう依存するかについて、検討した。得られる結果を、従来の遺伝子ターゲッティングなどのの実験結果と比較した。
英文摘要
A.「相同相互作用による非相同組換え」の解析。A-1.マウスでの検出と構造解析。BPVベクターのコトランスフェクションで相同組換えを選択したときに検出される非相同組換え産物の構造解析を進め、BPV複製との関係を示唆する結果を得た。A-2.定量系の確立。「相同相互作用による非相同組換え」産物を特異的に定量できる実験系を作った。これは、大腸菌の優性の薬剤(ストレプトマイシン)感受性遺伝子を逆向きに二つ持つプラスミドを、マウス細胞に導入し、二つの遺伝子が共に失われたものを、大腸菌に導入して薬剤で選択するというものである。A-3.大腸菌での検出。大腸菌の核酸分解酵素欠損株で、ホモロジーの端での非相同組換えを検出した。これは、recA機能に依存していた。B.アデノウイルスペクターで導入した遺伝子による標的遺伝子組換えに伴う非相同組換え。ウシパピローマウイルスプラスミドを染色体外にもつ細胞にドナーの組換えアデノウイルスを感染させ、その間での相同組換えで再構成されたneo+遺伝子を含む細胞のクローンを選択する系で、アデノウイルス部分が組み込まれた産物の解析をシークエンスレベルで行い、非相同組換えを検出した。C.相同組換え効率のホモロジーの長さと程度への依存性の理論の一般化。「中間体の連結部分がホモロジーにそってDNAの塩基対をランダムウォークし、ときに相同組換え体などへとプロセスされる。ホモロジーの端へぶつかれば、ある確率で、中間体が破壊される。」という一般的な場合について、相同組換え体の完成頻度がホモロジーの長さにどう依存するかについて、検討した。得られる結果を、従来の遺伝子ターゲッティングなどのの実験結果と比較した。
期刊论文(32)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
内藤拓、小林一三: "プログラム細胞死と「利己的な遺伝子」…制限酵素はなぜあるのか?" 実験医学. 13(8). 1444-1447 (1995)
Taku Naito，Kazuzo Kobayashi：“程序性细胞死亡和‘自私基因’……为什么我们有限制性酶？”13(8) (1995)。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
小林一三: "“利己的な遺伝子"単位としての制限酵素メチル化酵素系" 細胞工学. 14(9). 1015-1023 (1995)
Ichizo Kobayashi：“限制性酶甲基转移酶系统作为‘自私基因’单元”，细胞工程 14(9)。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Kusano,K.,Naito,T.,Handa,N.and Kobayashi,I.: "Restriction-modification systems as genomic parasites in competition for specific sequences" Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 92. 11095-11099 (1995)
Kusano,K.、Naito,T.、Handa,N. 和 Kobayashi,I.：“作为基因组寄生虫竞争特定序列的限制性修饰系统”Proc.Natl.Acad.Sci.USA。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
中山洋一,小林一三: "制限酵素はなぜあるのか?塩基配列に棲み分けた寄生遺伝子群" 化学と生物. 34. 73-75 (1996)
Yoichi Nakayama、Kazuzo Kobayashi：“为什么存在限制性酶？按碱基序列划分的寄生基因簇”《化学与生物学》34. 73-75 (1996)。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
共 16 条
    Thousands of adaptive changes emerging from thousands of genomes within a species
    • 批准号：
      23K05735
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
    • 资助金额：
      $3.08万
    • 财政年份：
      2023
    • 负责人：
      小林 一三
    • 依托单位：
      National Institute for Basic Biology
    制限酵素修飾酵素遺伝子の利己的ライフサイクル:転移・増幅・伝達の実験室での再現
    • 批准号：
      19657002
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Exploratory Research
    • 资助金额：
      $2.3万
    • 财政年份：
      2007
    • 负责人：
      小林 一三
    • 依托单位：
      The University of Tokyo
    ゲノム情報にもとづいた新規立体構造をもつ制限酵素の探索と機能解析
    • 批准号：
      07F07420
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for JSPS Fellows
    • 资助金额：
      $1.47万
    • 财政年份：
      2007
    • 负责人：
      小林 一三
    • 依托单位：
      The University of Tokyo
    制限修飾酵素による遺伝子発現制御と、その制限修飾遺伝子(病原体)・ゲノム(宿主)相互作用での役割
    • 批准号：
      03F03312
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for JSPS Fellows
    • 资助金额：
      $0.77万
    • 财政年份：
      2004
    • 负责人：
      小林 一三
    • 依托单位：
      The University of Tokyo
    海外基金