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中枢神経系の発生におけるbcl-2遺伝子の機能の解析

bcl-2基因在中枢神经系统发育中的功能分析

基本信息

批准号：
07264227
负责人：
恵口豊
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07264227/
关键词：
神経細胞死アポトーシスネクローシス Bcl-2 Bcl-x 小脳顆粒細胞 ICE 活性酸素

项目摘要

神経特異的イノレースのプロモーターを用いたbcl-2トランスジェニックマウスとbcl-2ノックアウトマウス及び野性型マウスから調製した小脳顆粒神経細胞は、カリウム濃度変化や各種薬剤処理、栄養因子除去等により誘導される神経細胞死に対してBcl-2量に依存して抵抗性を示すことを明らかにした(投稿準備中)。このことは、正常レベルの発現量のBcl-2が神経細胞死を阻害することを示している。1993年にBcl-2がAntoxidantとして働くことにより細胞死を抑制するという仮説が発表されたが、我々は、低酸素条件下で誘導される細胞死とそれに対するBcl-2の機能を検討し、Bcl-2がAntioxidantでないことを証明した(Nature,1995,374,811-813)。7316A細胞株やPC12細胞株は低酸素条件下で48時間培養すると約半数の細胞が細胞死を起こす。これらの細胞にBcl-2又はBcl-xLを発現させると、この細胞死は抑制された。ESR spin trap法により低酸素条件下では活性酸素量は検出限界以下であることが明らかとなり、活性酸素スカベンジャー(N-acetylcysteine)及び活性酵素スカベンジャー阻害剤(diethyl maleate)を加えても、Bcl-2、Bcl-xLの存在、非存在にかかわらず、この細胞死は全く影響を受けなかった。以上の結果は、Bcl-2は活性酵素を介さない機構で細胞死を抑制することを示している。Bcl-2が細胞死を抑制する分子機構を解析するために、我々はBcl-2が細胞内で局在する各小器官における機能の解析を試みた。Bcl-2は核の外膜や小胞体膜の他、ミトコンドリア膜に局在する。ミトコンドリアに直接傷害を与えるため、PC12細胞株を2.5mMKCNのその他や呼吸鎖阻害剤rotenoneやantimycinAにより6時間処理すると約半数の細胞が細胞死を起こす。この細胞死は、電子顕微鏡観察、蛍光顕微鏡観察により、ネクローシス様の細胞死であることが判明した。この細胞にBcl-2又はBcl-xLを発現させると、KCNにより誘導される細胞死は抑制された。アポトーシスの誘導反応に必須であると考えられるICE Protease及びそのホモログの阻害剤であるCmAやICE Inhibitorでも、これらの薬剤により誘導されるネクローシス様の細胞死が抑制された。15EA02:以上の結果は、これまでアポトーシスに特異的に作用すると考えられてきたBcl-2やICE Proteaseは、形態学的にネクローシスと判断される細胞死の少なくとも一部には関与することを示しており、その作用点の反応は、アポトーシスとネクローシスに共通する反応であると考えられる(Oncogene, in press)。

Neuro-specific cell death induced by changes in Bcl-2 concentration, various chemical treatments, and removal of nutrient factors depends on Bcl-2 level and resistance (submission preparation). The expression of Bcl-2 in normal cells was detected in normal cells. In 1993, the function of Bcl-2 as an anti-oxidant was investigated and demonstrated (Nature,1995,374,811-813). 7316A and PC12 cell lines were cultured in low pH for 48 hours, and about half of the cells died. The expression of Bcl-2 and Bcl-xL in these cells is inhibited by cell death. ESR spin trap method: Under the condition of low acidity, the amount of active acid can be detected below the limit, the active enzyme can be detected below the limit, the active acid can be detected below the limit, the active enzyme can be detected These results indicate that Bcl-2 activity is mediated by the mechanism of cell death inhibition. The molecular mechanism of Bcl-2 inhibiting cell death was analyzed and the function of Bcl-2 in various small organs was analyzed. Bcl-2 is located in the outer membrane of the nucleus and other parts of the somatic membrane. About half of the PC12 cells were killed when treated with rotenone and antimycinA at 2.5 mM KCN for 6 days. The cell death, electron microscopy, and optical microscopy were identified. Bcl-2 and Bcl-xL expression in these cells were inhibited by KCN. CmA and ICE Inhibitor are required for the induction and suppression of cell death by the drug. 15EA02: The above results show that there is no specific effect of Bcl-2 and ICE Protease, and there is no specific effect of Bcl-2 and ICE Protease on cell death.