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温度感受性ヒトp53癌抑制遺伝子を用いた細胞増殖制御機構の解明

利用温度敏感的人p53抑癌基因阐明细胞增殖控制机制

基本信息

批准号：
07272215
负责人：
土田信夫
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07272215/
关键词：
癌抑制遺伝子 p53 温度感受性変異株 G1停止アポトーシス Rb

项目摘要

p53癌抑制遺伝子の変異は殆ど全てのヒト癌で最も高頻度にみられる。我々は野生型p53のもつ細胞増殖機能に解析するために、ヒトp53の138番目をアラニンからバリンに変えた温度感受性変異株(vall38)を作成し、ラット初代線維芽細胞(REF)、ヒト骨肉腫細胞(Saos-2)、ヒトT細胞白血病(Jurkat)、およびヒト赤白血病細胞(K562)に導入した。これらの細胞を低温シフトしたときの細胞増殖に対する影響を、生細胞数、DNA含量等を基に解析したところ、Jurkat細胞はアポトーシスを他の細胞はG1停止をおこしていた。なおSaos-2細胞ではG2/M停止を起こすものもかなりあった。p53によるG1停止に関してはp21cipl(waf1)の発現誘導、cdk/cyclinの阻害、Rbの脱リン酸化、E2Fとの結合を介するDNA合成開始の阻害が考えられている。G1停止をおこす細胞でp53の下流のシグナル伝達をしらべたところ、K562細胞では上記と一致する。REF細胞ではp21cip1(waf1)の発現誘導を介さない、Rbの発現のないSaos-2細胞ではRbの代わりにp130がG1停止の、シグナル伝達に係わっていることが判明した。そこでREF、Saos-2細胞でのG1停止に、またJurkat細胞でのアポトーシスに関与する遺伝子をクローシングするため、低温シフト前と後それぞれ6時間サイクロヘキシミド存在下で培養し、mRNAを精製後cDNAライブラリーを作成した。低温シフト後に野生型活性によって発現誘導されると思われる新たな遺伝子の検索をピオチン/ストレプトアビジンによるサブトラクション法を用いて試みたが得ることが出来なかった。

P53 cancer suppresses the highest degree of cancer in all cases. The wild type p53T cell colonization machine was able to analyze the temperature sensitivity of the wild type p53 cell line (vall38), the primary line germ cell (REF), the bone and flesh cell (Saos-2), the T cell leukemia (Jurkat) and the erythroleukemia cell (K562). The number of cells, the number of raw cells, the content of DNA, and so on, were analyzed in terms of the number of cells, the number of raw cells, the content of DNA, and so on. The number of cells, the number of raw cells, and the content of Jurkat cells were analyzed. Please Saos-2 the cell, G2cyr M, stop it. Please start the alarm. P53 and G1 stop p21cipl (waf1) activation, cdk/cyclin blockage, Rb deacidification, and E2Function in combination with DNA synthesis. G1, p53 cell, K562 cell, K562 cell, p53 cell, p53 cell, K562 cell, K562 cell, p53 cell, K562 cell, K562 cell, p53 cell, The REF cell line p21cip1 (waf1) has shown that the Saos-2 cell has been introduced, the Rb cell has been replaced by the Rb cell, the p130 cell G1 has stopped, and the cell phone has reached the target address. The REF, Saos-2 cell cycle G1 stops, the Jurkat cell cycle does not change, and the temperature does not change. After the cryogenic cycle, 6 hours before and after the cryogenic cycle, there is a low temperature incubator, and after the mRNA test, the cDNA test is completed. After the cold weather, the wild-type active food was detected. The wild-type active food was detected. The new one was used to determine the temperature of the animal.