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歯周病原性細菌の保有するアポトーシス様細胞死誘導因子の単離・同定

牙周病原菌类凋亡细胞死亡诱导因子的分离与鉴定

基本信息

批准号：
12877303
负责人：
土田信夫
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

[1]歯周病原細菌Actinobacillus actinomycetemcomtans(A. a.)血青型aの殺細胞因子を部分精製し、当該活性画分でマウスを免役して特異性の高い抗A. a. 殺細胞因子モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ1クローンを得た。このハイブリドーマの産生する抗体は、ウエスタンプロット法において分子量約30kDのA. a. 菌由来蛋白質を認識し、かつ液相中でA. a. の殺細胞活性と免疫沈殿反応を起こした。一方、当該殺細胞活性はヒト上皮様がん細胞の細胞周期をG2で抑圧し、細胞形態の著しい伸展を起こすことから、A. a.-bで報告されているCytolethal distending toxin(CDT)のホモログと推定された。A. a.-aでCDTの存在を示したのは本研究が最初である。[2]歯周病原細菌Bacteroides forthysus(B. f.)の殺細胞因子の同定を目的とし、当該因子を精製した。当該因子は、(a)SDS-PAGEにおいて単量体の分子量約28. 5kD、または複合体として分子量約55、57kDを示し、(b)核酸に親和性を有すること、(c)ヒト口腔がん由来上皮様癌細胞株に投与したとき、サイクリンB1の分解抑制を伴って細胞周期をS期後期〜G2期に停止する活性を持つ。これら特徴により、当該殺細胞因子はCDTファミリーの一員と推定される。[3]B. f. の殺細胞活性に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ7クローンを樹立した。これらハイブリドーマの産生する抗体は、(a)液相中のB. f. 殺細胞因子と免疫沈殿反応を起こした。(b)ウエスタンブロツト法において、上記[1]で精製した殺細胞因子(分子量約28. 5、55、及び57キロダルトン)と反応した。

[1]Actinobacillus actinomycetemcomtans(A. a.) A cytocidal cytokine is partially purified, and when the active fraction is purified, it is highly specific and resistant to A. a. Cytokines are produced by the production of anti-cytokine antibodies. The molecular weight of the antibody is about 30kD. a. Protein from bacteria is recognized, liquid phase is in A. a. Cell killing activity and immune response One side, when the cytocidal activity is activated, the cell cycle of the cell is inhibited by G2, and the cell morphology is extended. a.- b Report on the determination of cytosolic distressing toxin(CDT). A. a.- A. The existence of CDT is shown in this study. [2]Bacteroides forthysus(B. f.) The aim of killing cytokines is to purify them. When the factor is not (a)SDS-PAGE, the molecular weight of the sample is about 28. 5kD, 57kD,(b) nucleic acid affinity,(c) inhibition of decomposition of B1 in oral epithelial cancer cell lines, and activity in late S to G2 cell cycle arrest. The characteristics of this cytokine are as follows: [3]B. f. The cell killing activity of the mouse is very high. The antibody is produced in (a) the liquid phase. f. Cytokines and immune response (b)[1] Purified cytocidal factor (molecular weight about 28. 5, 55, and 57.