歯周病原性細菌の保有するアポトーシス様細胞死誘導因子の単離・同定

牙周病原菌类凋亡细胞死亡诱导因子的分离与鉴定

基本信息

批准号：
12877303
负责人：
土田信夫
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

[1]歯周病原細菌Actinobacillus actinomycetemcomtans(A. a.)血青型aの殺細胞因子を部分精製し、当該活性画分でマウスを免役して特異性の高い抗A. a. 殺細胞因子モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ1クローンを得た。このハイブリドーマの産生する抗体は、ウエスタンプロット法において分子量約30kDのA. a. 菌由来蛋白質を認識し、かつ液相中でA. a. の殺細胞活性と免疫沈殿反応を起こした。一方、当該殺細胞活性はヒト上皮様がん細胞の細胞周期をG2で抑圧し、細胞形態の著しい伸展を起こすことから、A. a.-bで報告されているCytolethal distending toxin(CDT)のホモログと推定された。A. a.-aでCDTの存在を示したのは本研究が最初である。[2]歯周病原細菌Bacteroides forthysus(B. f.)の殺細胞因子の同定を目的とし、当該因子を精製した。当該因子は、(a)SDS-PAGEにおいて単量体の分子量約28. 5kD、または複合体として分子量約55、57kDを示し、(b)核酸に親和性を有すること、(c)ヒト口腔がん由来上皮様癌細胞株に投与したとき、サイクリンB1の分解抑制を伴って細胞周期をS期後期〜G2期に停止する活性を持つ。これら特徴により、当該殺細胞因子はCDTファミリーの一員と推定される。[3]B. f. の殺細胞活性に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ7クローンを樹立した。これらハイブリドーマの産生する抗体は、(a)液相中のB. f. 殺細胞因子と免疫沈殿反応を起こした。(b)ウエスタンブロツト法において、上記[1]で精製した殺細胞因子(分子量約28. 5、55、及び57キロダルトン)と反応した。

[1]牙周致病性细菌静脉细菌的细胞杀伤因子（A. a。），血蓝色A型被部分纯化，并用活性馏分对小鼠进行免疫，以获得产生高度特异性抗A的杂交瘤1克隆。一个。细胞杀伤因子单克隆抗体。该杂交瘤产生的抗体识别出源自A. a的蛋白质。在西部绘制中，分子量约为30 kd的细菌，在液相，抗体与A. a产生了免疫沉淀反应。细胞杀伤活动。另一方面，细胞杀伤活性抑制了人类上皮样癌细胞的细胞周期，并引起细胞形态的显着扩展，并被认为是A. A.-B.报道的细胞骨延伸毒素（CDT）的同源物。答：这项研究是第一个证明CDT在A.-A的存在的研究。 [2]靶标是鉴定牙周致病细菌细菌菌群（B.F.）的细胞杀细胞因子，并纯化该因子。该因子在SDS-PAGE中表现出（a）单体的分子量，或分子量约为55或57 kD作为复合物，（b）对核酸具有亲和力，并且（c）具有使细胞周期从后期到G2阶段的活性，并抑制了环蛋白B1的降解。这些特征认为细胞杀死因子是CDT家族的成员。 [3]建立了7个杂交瘤7克隆，该克隆产生了针对B.F.细胞杀伤活性的单克隆抗体。这些杂交瘤（a）产生的抗体引起与B.F.的免疫沉淀反应。液相的细胞杀死因子。（b）在蛋白质印迹法中，细胞杀死因子（大约28.5、55和57千瓦尔顿的分子量）与上面[1]中纯化的细胞杀死因子反应。