免疫不全症およびDNA修復欠損の原因遺伝子HYRCの特性と単離

1.マウス重症複合型免疫不全症(scid)の放射線高感受性を合補するヒトの遺伝子を我々はヒト8番染色体8q11に初めてマッピングした。このDNA領域のコスミドから作製した数種類の遺伝的マーカーを1.7MbのYACクローン934g4をスクリーニングした。このYAC領域のゲノムDNAがDNA依存性蛋白キナーゼ触媒部位DNA-PKcs(旧HYRCおよびp350に代わる命名)をコードしていることがサザンブロットにより明らかとなった。2.我々が作製したヒト/マウスscidハイブリッド細胞を用いたノーザンブロットはDNA-Pkcsの発現に一致して放射線感受性が回復することを示した。また、生化学的アッセイ法によりDNA-PK活性の回復した細胞でも同様に放射線感受性の回復が認められた。反対に、DNA-PK阻害剤により活性を低下した細胞ではDNA修復能が低下する傾向にあった。3.以上のゲノムDNA解析および遺伝子発現からscidの原因遺伝子をDNA-PKcsと同定した。scid突然変異ではV(D)J組換えおよびDNA修復が欠損していることが知られている。scid細胞のキナーゼ活性欠損とこれら諸形質の関連性およびDNA-PKcsの機能について、細胞周期やシグナル伝達の我々の測定結果から検討を加えた。

1.マウス重症複合型免疫不全症(scid)の放射線高感受性を合補するヒトの遺伝子を我々はヒト8番染色体8q11に初めてマッピングした。このDNA領域のコスミドから作製した数種類の遺伝的マーカーを1.7MbのYACクローン934g4をスクリーニングした。このYAC領域のゲノムDNAがDNA依存性蛋白キナーゼ触媒部位DNA-PKcs(旧HYRCおよびp350に代わる命名)をコードしていることがサザンブロットにより明らかとなった。2.我々が作製したヒト/マウスscidハイブリッド細胞を用いたノーザンブロットはDNA-Pkcsの発現に一致して放射線感受性が回復することを示した。また、生化学的アッセイ法によりDNA-PK活性の回復した細胞でも同様に放射線感受性の回復が認められた。反対に、DNA-PK阻害剤により活性を低下した細胞ではDNA修復能が低下する傾向にあった。3.以上のゲノムDNA解析および遺伝子発現からscidの原因遺伝子をDNA-PKcsと同定した。scid突然変異ではV(D)J組換えおよびDNA修復が欠損していることが知られている。scid細胞のキナーゼ活性欠損とこれら諸形質の関連性およびDNA-PKcsの機能について、細胞周期やシグナル伝達の我々の測定結果から検討を加えた。