P1.1mcm3蛋白の機能とヒトパピローマウイルスE6蛋白による修飾

P1.1mcm3蛋白的功能及人乳头瘤病毒E6蛋白的修饰

• 批准号: 07272250
• 负责人: 清野 透
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Aichi Cancer Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07272250/
• 关键词: MCM; CDC47; DNA複製; ヒトパピローマウイルス

P1.1mcm3の全長cDNAを単離した。その後、出芽酵母より単離された新たなMCMファミリーの一員であるCDC47ともっともホモロジーが高いことが判明したため、以後ヒトCDC47(hCDC47)と呼ぶこととする。hCDC47遺伝子の細胞周期に伴う転写動態を調べた。血清飢餓によりG0期に同調した細胞に、血清を添加し経時的にRNA量の変化を調べた。G0期ではhCDC47 RNAは検出されず、血清添加後、12時間後よりRNAが検出され、S期進入の直前にはピークに達した。上流のプロモーター領域には複数のE2F結合配列が存在し、細胞周期による転写制御への関わりが示唆された。また、予想されるように同領域のプロモーター活性はHPV E7によって、活性化された。抗hCDC47抗血清を用いた免疫細胞化学的解析の結果、hCDC47は長期の血清飢餓により消失するが、増殖中の細胞においては細胞周期に伴う量的な変化および局在の変化はほとんどなくM期を除き常に核に局在することが分かった。また、核に局在するhCD47はG1期においては核に強固に結合しているが、S期の進行に伴い核から容易に遊離される状態に変換することが明らかになった。また、血清飢餓によりhCDC47を枯渇させた後、hCDC47の翻訳開始コドン付近に対するアンチセンス オリゴヌクレオチドの添加によりhCDC47合成は特異的に抑制されS期移行の遅延が見られた。このことから、hCDC47はDNA複製開始に必須であることが示唆された。一方、hCDC47 cDNAをプローブとして、ショウジョウバエのcDNAライブラリーを検索し、ショウジョウバエ ホモログを単離した。アミノ酸配列上、62%の一致が見られた。現在、cDNAの上流のgDNAを単離し解析をすすめている。

The full-length cDNA of P1.1mcm3 is isolated.その后, budding yeast より単された新たなMCMファミリーの一member であるCDC47ともっともホモロジーが高いことが clarified したため, and later ヒトCDC47 (hCDC47) and ぶこととする. The cell cycle of hCDC47 is closely related to the dynamics of the cell cycle. The amount of RNA was changed in serum-starved G0-phase cells and when serum was added. In the G0 phase, hCDC47 RNA was released, and after the serum was added, the RNA was released 12 hours later, and the S phase was entered directly before entering. The existence of the upstream E2F binding domain and the cell cycle control system are the same as those in the field.また, I think されるように same field のプロモーターactivated HPV E7 によって, activated された. Results of immunocytochemistry analysis of anti-hCDC47 antiserum, long-term serum starvation of hCDC47, disappearance of hCDC47, and ongoing proliferation The process of cell cycle is accompanied by a large amount of changes in the structure of the cell cycle. The はほとんどなくM period をexcept the regular に nuclear bureau is divided into することがかった.また、The nuclear bureau is strong and strong in the するhCD47はG1 phase においてはNUCLEAR にしているが、 The progression of S phase is easy and free, and the state of the core is easy to change.また, serum starvation によりhCDC47を dry 渇させた后, hCDC47の訳starts コドンpayNearly に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドのAdd によりhCDC47 to synthesize a specific ににれS phase transition の遅慅抌见られた. It is necessary for hCDC47 and hCDC47 to start DNA replication. One side, hCDC47 cDNA をプローブとして, ショウジョウバエのcDNA ライブラリーを検SOし, ショウジョウバエホモログを単里した. Aminonic acid has a consistent composition of 62%. Now, cDNA's upper stream gDNA's analysis is done.

项目成果

Adachi, A.: "Evidence for propagation of human papillomavirus type 47 DNA in cells of carcinomas of epidermodysplasia verruciformis and those transplanted to SCID mice. papillomavirus of cutaneous origin." Virology. (印刷中).

Adachi, A.：“人乳头瘤病毒 47 型 DNA 在疣状表皮发育不良癌细胞和移植到 SCID 小鼠体内的细胞中繁殖的证据。皮肤来源的乳头瘤病毒（正在出版）。”

Adachi, A.: "Detection of human papillomavirus type 47 DNA in malignant lesions of epidermodysplasia verruciformis with protocols for precise typing of related HPV DNAs." J. Clin. Microbiol.(印刷中).

Adachi, A.：“检测疣状表皮发育不良恶性病变中的人乳头瘤病毒 47 型 DNA，并进行相关 HPV DNA 的精确分型。”J. Clin。

Fujita, M.: "hCD47, a human member of the MCM family: dissociation of the nucleus-bound form during S phase." J. Biol. Chem.(印刷中).

Fujita, M.：“hCD47，MCM 家族的人类成员：S 期核结合形式的解离。”J. Biol。

Fujita, M: "Inhibition of S phase entry of human fibroblasts by an antisense oligomer against hCDC47." Biochem. Biophys. Res. Commun.(印刷中).

Fujita，M：“hCDC47 反义寡聚体抑制人成纤维细胞进入 S 期。”Biochem Res。

Hiraiwa, A.: "E7 proteins of four groups of human papillomaviruses, irrespective of their tissue-tropism or cancer-association, posses ability to transactivate transcriptional promoters E2F-site-dependently." Virus Gene. (印刷中).

Hiraiwa, A.：“四组人乳头瘤病毒的 E7 蛋白，无论其组织向性或癌症相关性如何，都具有反式激活 E2F 位点依赖性病毒基因的能力。”